細(xì)胞攻略：MM.1S(人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞)培養(yǎng)教程

細(xì) 胞 基 本 信 息

• 細(xì)胞名稱： MM.1S(人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞)
• 細(xì)胞別稱： MM.1S；MM1-S；MM-1S；MM1S
• 細(xì)胞貨號(hào)： SNL-553
• 生長(zhǎng)特性： 半貼壁
• 培養(yǎng)條件： 1640+15% FBS+1% P/S
• 培養(yǎng)環(huán)境: 37℃；5% CO2；飽和濕度
• 細(xì)胞簡(jiǎn)介: MM.1S細(xì)胞源于患有多發(fā)性骨髓瘤的黑人女性患者，CD25+, CD38+, CD52+, CD59+，表達(dá)糖皮質(zhì)激素受體（GR），分泌IgGλ輕鏈，對(duì)地塞米松敏感。

▲細(xì)胞正常生長(zhǎng)形態(tài)照片

01、MM.1S細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)
 

• 半換液法：

1. 準(zhǔn)備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（培養(yǎng)基提前預(yù)熱）
2. 將培養(yǎng)瓶豎立靜置一段時(shí)間，待細(xì)胞沉底；（肉眼觀察細(xì)胞沉底情況）
3. 吸頭緊貼液面，小心吸出一半的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)移到離心管；
4. 900-1000rpm 3min離心，離心管里若有細(xì)胞，則用新鮮培養(yǎng)基重懸后放回原瓶；
5.原瓶補(bǔ)充一半的新鮮培養(yǎng)基。
tips：建議半換液2-3次后進(jìn)行離心換液。
 

• 離心換液法：

1. 備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（培養(yǎng)基提前預(yù)熱）
2. 將所有細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中；
3. 900-1000rpm，3min離心；
4. 棄上清，加5mL PBS輕輕重懸細(xì)胞進(jìn)行潤(rùn)洗，再900-1000rpm，3min離心；
tips：此處PBS潤(rùn)洗是為了去除細(xì)胞碎片，平時(shí)培養(yǎng)若細(xì)胞碎片不多可以忽略此步驟。
5. 培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；
6.離心完成后棄上清，加適量新鮮培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞沉淀，將細(xì)胞懸液接種回培養(yǎng)瓶中，混勻細(xì)胞，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
 
03、MM.1S細(xì)胞傳代方法
 
1. 備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（培養(yǎng)基提前預(yù)熱）
2. 用移液器吸取培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中；使用1ml槍頭輕吹貼壁細(xì)胞，如果不好吹下來(lái)，可以使用胰酶消化下來(lái)，也轉(zhuǎn)移至離心管中；
3. 900-1000rpm，3min離心收集細(xì)胞；
4. 在培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；（T25推薦10mL，T75推薦20mL）
5. 離心完成后，棄離心管內(nèi)上清，然后加入適量新鮮培養(yǎng)基，輕輕重懸吹散細(xì)胞，將細(xì)胞懸液均勻接種至培養(yǎng)瓶中，輕輕混勻后將細(xì)胞放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
tips：注意控制吹打力度盡可能輕柔和離心轉(zhuǎn)速以及時(shí)間不要過(guò)高，避免細(xì)胞受機(jī)械損傷。
傳代比例推薦1：2
 
04、MM.1S細(xì)胞凍存方法
 
1.準(zhǔn)備所需的培養(yǎng)基、PBS、血清、DMSO、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（試劑需提前預(yù)熱）
tips：若凍存前培養(yǎng)基已經(jīng)變黃，先換液靜置培養(yǎng)4h左右，待細(xì)胞活力穩(wěn)定后再進(jìn)行凍存。
2. 根據(jù)收集到細(xì)胞量，配制相應(yīng)量的凍存液，并準(zhǔn)備相應(yīng)數(shù)量的凍存管，在凍存管上標(biāo)志細(xì)胞名稱，代次，凍存時(shí)間等信息。推薦凍存液配方：92%FBS+8%DMSO；凍存密度300萬(wàn)細(xì)胞/mL/管。
tips：凍存密度過(guò)低將導(dǎo)致復(fù)蘇后狀態(tài)不佳。
3. 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中1000rpm，3min離心收集細(xì)胞；
4. 離心完成后棄上清，加入相應(yīng)量的配置好的凍存液輕輕重懸混勻細(xì)胞，將細(xì)胞懸液分裝至凍存管中。注意吹打力度，不要產(chǎn)生過(guò)多氣泡；
tips：加入凍存液混勻細(xì)胞后及時(shí)分裝并將細(xì)胞降溫凍存，以減少DMSO對(duì)細(xì)胞的毒性。
5. 將細(xì)胞放置程序降溫凍存盒中，再將凍存盒轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱進(jìn)行降溫凍存。
6. 次日（16h-24h后）復(fù)蘇一管檢查凍存效果，確認(rèn)沒(méi)問(wèn)題后及時(shí)將凍存細(xì)胞放置液氮中保存，細(xì)胞在-80℃冰箱放置時(shí)間不要超過(guò)3天。
 
05、MM.1S細(xì)胞復(fù)蘇方法
 
1. 提前將水浴鍋預(yù)熱至37℃，培養(yǎng)基復(fù)溫至室溫或37℃，離心機(jī)設(shè)置好轉(zhuǎn)速；
2. 將凍存細(xì)胞從液氮或-80℃冰箱中取出，迅速置于37℃水浴，快速搖晃至完全融化，融化時(shí)間不超過(guò)2min；
tips：若液氮或冰箱距離細(xì)胞房較遠(yuǎn)，細(xì)胞需要放在干冰或冰盒上運(yùn)送至細(xì)胞房。
水浴時(shí)使用一次性PE手套包住凍存管避免直接接觸水源，避免污染。
3. 直接將凍存管900-1000rpm 3min離心，同時(shí)在培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；
4. 離心完成后棄上清，吸取1mL新鮮培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，吹散細(xì)胞后接種到培養(yǎng)瓶中；
5.使用十字法或8字法將細(xì)胞混勻后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
tips：整個(gè)細(xì)胞復(fù)蘇過(guò)程在盡可能5-10min內(nèi)完成。
 
06、MM.1S細(xì)胞收貨攻略
 
1. 拆封包裝盒，確認(rèn)細(xì)胞，說(shuō)明書(shū)等是否齊全，收貨細(xì)胞名與所購(gòu)買細(xì)胞是否符合；
2. 觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，有無(wú)漏液，培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基是否有肉眼可見(jiàn)的絮狀物或者渾濁等，發(fā)現(xiàn)異常及時(shí)拍照聯(lián)系銷售人員；
3. 確認(rèn)無(wú)異常后，將培養(yǎng)瓶表面消毒，然后撕掉封口膜豎立放入培養(yǎng)箱平衡4h左右，讓?xiě)腋〖?xì)胞沉下培養(yǎng)瓶底部；
4. 平衡過(guò)程中可以仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，知悉細(xì)胞所需培養(yǎng)體系，培養(yǎng)環(huán)境以及培養(yǎng)注意事項(xiàng)等；
5. 平衡完成后豎立取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，此時(shí)大部分細(xì)胞沉在培養(yǎng)瓶底部，小心吸取上清至離心管中，保留10mL左右培養(yǎng)基在培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，小心操作，盡量不要吸到沉在底部的細(xì)胞；
6. 將離心管1200rpm，5min離心收集未沉下培養(yǎng)瓶底部的細(xì)胞，上清可以4℃保存，后續(xù)用于培養(yǎng)細(xì)胞，以平穩(wěn)過(guò)度到自己的培養(yǎng)基。將收集到的細(xì)胞接種至原培養(yǎng)瓶；
7. 觀察細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)，以及團(tuán)塊數(shù)量、大小決定傳代或繼續(xù)培養(yǎng)。
 
常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案
 
培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞碎片較多怎么處理？
1. 細(xì)胞內(nèi)的黑色顆粒是細(xì)胞外分泌泡及細(xì)胞器折光，這個(gè)屬于細(xì)胞自身特性，無(wú)法清除也無(wú)法改變，大部分細(xì)胞都會(huì)有這種現(xiàn)象，只是不同細(xì)胞顆粒多少有區(qū)別，細(xì)胞培養(yǎng)體系不適應(yīng)、營(yíng)養(yǎng)缺乏、滲透壓異常等均可能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)顆粒增加，建議使用合適的培養(yǎng)條件。
2. 細(xì)胞外的黑色顆粒大部分是細(xì)胞碎片和細(xì)胞代謝產(chǎn)物，可通過(guò)900-1000rpm，3min離心以去除部分碎片。少量碎片不影響細(xì)胞生長(zhǎng)，不建議頻繁離心。
 

產(chǎn)品推薦

【SNL-553】MM.1S(人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞)

【SNLM-553】MM.1S細(xì)胞專用完全培養(yǎng)基