群養(yǎng)vs隔離：斑馬魚(yú)胚胎社交狀態(tài)對(duì)神經(jīng)毒素敏感性與行為表現(xiàn)的影響

• 群養(yǎng)組：將5個(gè)胚胎固定在一個(gè)24孔板的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)孔底部中心。胚胎在環(huán)內(nèi)可以自由移動(dòng)、相互接觸，模擬自然“抱團(tuán)”狀態(tài)；
• 隔離組：使用定制的板，板上帶有5個(gè)獨(dú)立的微小凹槽，每個(gè)凹槽剛好容納一個(gè)胚胎。凹槽間的隔斷確保胚胎無(wú)法發(fā)生物理接觸，運(yùn)動(dòng)軌跡也完全獨(dú)立，實(shí)現(xiàn)了物理隔離。

Rotenone是一種天然植物毒素，常用于在斑馬魚(yú)中模擬帕金森病癥狀，其神經(jīng)毒性明確。研究選用Rotenone，實(shí)驗(yàn)設(shè)置了四個(gè)濃度梯度：1.0， 10.1， 20.3 nM，以及0.1% DMSO溶劑對(duì)照。濃度范圍基于前期魚(yú)胚胎急性毒性（FET）測(cè)試結(jié)果，涵蓋了從無(wú)效應(yīng)到明顯效應(yīng)的區(qū)間。

實(shí)驗(yàn)使用野生型斑馬魚(yú)胚胎。在胚胎發(fā)育的21至47小時(shí)這一關(guān)鍵窗口期，研究團(tuán)隊(duì)每小時(shí)進(jìn)行一次長(zhǎng)達(dá)8分鐘的高清視頻錄制。這一時(shí)段覆蓋了自發(fā)卷尾行為的起始、高峰及逐漸向游泳行為過(guò)渡的全過(guò)程。使用斑馬魚(yú)微視行為分析系統(tǒng)（DanioScope）分析視頻。軟件通過(guò)識(shí)別胚胎尾部像素的變化，自動(dòng)量化兩個(gè)核心行為參數(shù)：① 平均卷尾爆發(fā)次數(shù)/分鐘（反映運(yùn)動(dòng)頻率），② 平均卷尾持續(xù)時(shí)間（以秒計(jì)，反映單次運(yùn)動(dòng)的強(qiáng)度）。

結(jié)果
實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過(guò)圖表清晰地揭示，胚胎的“社交生活”對(duì)其行為模式產(chǎn)生了深刻影響，甚至改變了它們對(duì)神經(jīng)毒素的反應(yīng)。

1.Rotenone的毒性在“熱鬧”的群養(yǎng)胚胎中更易顯現(xiàn)
圖1群養(yǎng)組數(shù)據(jù)顯示，在群養(yǎng)條件下，暴露于最高濃度Rotenone（20.3 nM）的胚胎，其平均卷尾持續(xù)時(shí)間（圖1A） 和卷尾爆發(fā)頻率（圖1C） 在30小時(shí)前均出現(xiàn)顯著下降。這表明在高濃度毒素作用下，胚胎的神經(jīng)肌肉活動(dòng)受到了明顯抑制。