流式、免疫熒光、免疫組化等實(shí)驗(yàn)用的抗體有什么區(qū)別？

流式、免疫熒光、免疫組化還有WB、ELISA等都是基于抗原抗體特異性反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，其核心就是抗體，本質(zhì)上都是一樣的東西，只是由于儀器、原理、檢測(cè)方式的差異，抗體的特異性、靈敏度、宿主、是否標(biāo)記等方面有區(qū)別。

1流式檢測(cè)

1. 主要設(shè)備

流式細(xì)胞儀：流式細(xì)胞儀是一種在液流系統(tǒng)中快速檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞或多個(gè)微粒的多種物理和化學(xué)特性的生物醫(yī)學(xué)儀器，它結(jié)合了流體學(xué)、光學(xué)、電子學(xué)和計(jì)算機(jī)科學(xué)等多種技術(shù)，能夠?qū)��?xì)胞進(jìn)行多參數(shù)、定量的分析和分選。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，它可以被視為一個(gè) “細(xì)胞的超高速拍照和分揀系統(tǒng)” ，它讓細(xì)胞排成單列逐個(gè)通過(guò)一個(gè)檢測(cè)點(diǎn)，在瞬間對(duì)其進(jìn)行“拍照”（檢測(cè)光學(xué)信號(hào)），然后根據(jù)“照片”的特征，決定是否給這個(gè)細(xì)胞帶上電荷，從而將其分選到指定的容器中。

2. 實(shí)驗(yàn)原理

通過(guò)熒光物質(zhì)直接標(biāo)記抗體，與細(xì)胞懸液孵育后，通過(guò)流式細(xì)胞儀激發(fā)并檢測(cè)細(xì)胞上的熒光情況，進(jìn)行結(jié)果分析或分選。屬于抗體的直接法應(yīng)用。

3. 抗體特性

• 大多采用精選高靈敏度、高特異性單克隆抗體，降低非特異性反應(yīng)，提高檢出率

• 多數(shù)抗體是針對(duì)細(xì)胞表面抗原，只有少數(shù)針對(duì)胞內(nèi)抗原（需破膜）

• 熒光物質(zhì)直接標(biāo)記，直接法檢測(cè)，無(wú)需復(fù)雜的酶標(biāo)二抗、生物素等信號(hào)放大系統(tǒng)

 4. 結(jié)果呈現(xiàn)

▲左：SNFA-311流式檢測(cè)直方圖   右：SNFA-311流式檢測(cè)散點(diǎn)圖

2、免疫熒光、免疫組化、WB及ELISA等實(shí)驗(yàn)

1. 主要設(shè)備

免疫熒光：熒光顯微鏡等

免疫組化：普通光學(xué)顯微鏡等

WB：電泳儀、轉(zhuǎn)印儀、ECL發(fā)光檢測(cè)儀或膠片等

ELISA：酶標(biāo)板、酶標(biāo)儀等

2. 實(shí)驗(yàn)原理

待樣本處理好后，先與一抗抗體孵育結(jié)合，再通過(guò)通用酶標(biāo)或熒光二抗與一抗抗體孵育結(jié)合，最后通過(guò)酶標(biāo)或熒光二抗與底物或者激發(fā)光激發(fā)后檢測(cè)。多屬于抗體的間接法應(yīng)用，需要配合二抗或者其他信號(hào)放大系統(tǒng)使用。

3. 抗體特性

• 純化的單克隆抗體或者多克隆抗體，種屬、特異性、靈敏度要求低于流式抗體

• 不同實(shí)驗(yàn)技術(shù)，可以檢測(cè)胞內(nèi)、胞外、細(xì)胞膜幾乎所有部位的抗原

• 多數(shù)是間接法檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果一定程度受二抗、信號(hào)放大系統(tǒng)影響，實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)

4. 結(jié)果呈現(xiàn)

綜上，流式抗體與常規(guī)免疫熒光、免疫組化等使用的抗體雖然本質(zhì)上是一樣的，但是由于技術(shù)需求不同，實(shí)際抗體性質(zhì)、使用方式、檢測(cè)內(nèi)容等多方面參數(shù)都會(huì)有區(qū)別，需要根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)需要甄別選擇哦。

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