原代細胞（Primary Culture Cells）提取操作過程
原代細胞（Primary Culture Cells）是從生物體組織中直接分離并立即在體外培養(yǎng)的細胞。這類細胞在生命科學領域中具有重要價值，主要用于基礎研究、藥物開發(fā)和生物醫(yī)學研究。由于原代細胞成長緩慢，繁衍必定的代數(shù)中止成長。所以一般認為：培育的原代的1代和傳代到10代以內的細胞統(tǒng)稱為原代細胞培育。
原代細胞的提取的整個操作過程：
1. 整個操作要在潔凈通風的超凈臺下進行，所有的器件要高壓消毒。
2. 依據(jù)BALB/c小鼠的體重，用10ml/kg3%濃度的麻醉；將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內，這一步不只能夠消毒，也能夠讓小鼠體毛浸濕，后續(xù)剃去皮毛的時分不會沾到剪刀或安排上。
3. 用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟，裝有PBS的注射器刺進心尖，同時在右心耳處剪開一個小口，緩慢推進注射器，隨著心臟的跳動，將體內的血液沖洗出來。
4. 取出小鼠的肺部安排，將肺安排切成小米粒樣的巨細，置于預冷的HBSS中反復沖洗幾回。
5. 將小米粒巨細的肺安排置于培育瓶中（培育瓶前一天用1%明膠溶液包被培育面，4度過夜，小鼠處理前，將培育瓶放置培育箱中，使其溫度恢復至37度），置于培育箱37度的環(huán)境下，消化4個小時。
6. 消化4小時后，參加RPMI1640培育基（有10%血清、1%雙抗、1%內皮細胞成長因子）10ml（*增加培育基，能夠是正常培育時的2倍量），持續(xù)培育24小時（持續(xù)培育的時刻可依據(jù)細胞貼壁狀況適當調整）。
7. 24小時后，取出肺安排，鏡下觀察細胞狀態(tài)，換液。
8. 原代細胞的提取和培育是很慢的過程，一般需比及24小時后，才能在鏡下看到些許細胞群，一周到兩周后才會看到鵝卵石樣的擺放狀況。
9. 原代細胞2-3天換液一次，由于內皮細胞成長形成單層時，會出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象。所以，內皮細胞成長挨近單層時就能夠傳代了，不要比及長得非常滿。
原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學和生物醫(yī)學基礎研究，如蛋白質組學、基因組學、細胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學研究等，還可應用于當今熱門的生物醫(yī)藥產業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。
在這些應用中幾乎都涉及了幾個最常見的且最基礎的細胞實驗：
1、細胞增殖檢測：
常見檢測方法：CCK8檢測法 ，MTT檢測法，Brdu檢測法，Edu檢測法，平板克隆形成。
2、細胞周期檢測
常見檢測方法：流式檢測細胞周期，標記有絲分裂百分率法。
3、細胞凋亡檢測
常見檢測方法：流式檢測細胞凋亡，線粒體膜電位，活性氧檢測，Hoechst染色，電鏡，TUNEL。
4、細胞轉移能力檢測
常見檢測方法：細胞劃痕實驗，Transwell實驗，Invasion實驗。
原代細胞的提取的整個操作過程：
1. 整個操作要在潔凈通風的超凈臺下進行，所有的器件要高壓消毒。
2. 依據(jù)BALB/c小鼠的體重，用10ml/kg3%濃度的麻醉；將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內，這一步不只能夠消毒，也能夠讓小鼠體毛浸濕，后續(xù)剃去皮毛的時分不會沾到剪刀或安排上。
3. 用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟，裝有PBS的注射器刺進心尖，同時在右心耳處剪開一個小口，緩慢推進注射器，隨著心臟的跳動，將體內的血液沖洗出來。
4. 取出小鼠的肺部安排，將肺安排切成小米粒樣的巨細，置于預冷的HBSS中反復沖洗幾回。
5. 將小米粒巨細的肺安排置于培育瓶中（培育瓶前一天用1%明膠溶液包被培育面，4度過夜，小鼠處理前，將培育瓶放置培育箱中，使其溫度恢復至37度），置于培育箱37度的環(huán)境下，消化4個小時。
6. 消化4小時后，參加RPMI1640培育基（有10%血清、1%雙抗、1%內皮細胞成長因子）10ml（*增加培育基，能夠是正常培育時的2倍量），持續(xù)培育24小時（持續(xù)培育的時刻可依據(jù)細胞貼壁狀況適當調整）。
7. 24小時后，取出肺安排，鏡下觀察細胞狀態(tài)，換液。
8. 原代細胞的提取和培育是很慢的過程，一般需比及24小時后，才能在鏡下看到些許細胞群，一周到兩周后才會看到鵝卵石樣的擺放狀況。
9. 原代細胞2-3天換液一次，由于內皮細胞成長形成單層時，會出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象。所以，內皮細胞成長挨近單層時就能夠傳代了，不要比及長得非常滿。
原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學和生物醫(yī)學基礎研究，如蛋白質組學、基因組學、細胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學研究等，還可應用于當今熱門的生物醫(yī)藥產業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。
在這些應用中幾乎都涉及了幾個最常見的且最基礎的細胞實驗：
1、細胞增殖檢測：
常見檢測方法：CCK8檢測法 ，MTT檢測法，Brdu檢測法，Edu檢測法，平板克隆形成。
2、細胞周期檢測
常見檢測方法：流式檢測細胞周期，標記有絲分裂百分率法。
3、細胞凋亡檢測
常見檢測方法：流式檢測細胞凋亡，線粒體膜電位，活性氧檢測，Hoechst染色，電鏡，TUNEL。
4、細胞轉移能力檢測
常見檢測方法：細胞劃痕實驗，Transwell實驗，Invasion實驗。
