生物藥殘留檢測利器：Protein A、HCP、宿主DNA與內(nèi)毒素解決方案

生物藥物包括單抗、重組蛋白、病毒載體等，通常由細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)生，經(jīng)純化、除菌過濾、制劑工藝后獲得。生產(chǎn)過程中可能會引入微生物污染、熱原、細(xì)胞成份、工藝成份等外來雜質(zhì)，影響藥品的安全性和有效性，因此對雜質(zhì)的鑒別、定量、定性和控制是非常重要的。

一、Protein A 殘留檢測
Protein A 是在生產(chǎn)抗體類藥物時常用的純化柱填料，在洗脫生物藥的過程中，可能被一起浸出，導(dǎo)致抗體藥物中帶有Protein A的殘留。這些微量殘留對抗體藥物的安全性（引起機體副反應(yīng)）和有效性（影響藥效和藥代動力學(xué)）具有潛在的隱患，使其成為工藝相關(guān)雜質(zhì)，2020版《中國藥典》、美國 FDA、美國 USP130等法規(guī)均規(guī)定需要進(jìn)行嚴(yán)格的污染監(jiān)測。

部分相關(guān)產(chǎn)品：

針對Protein A的殘留檢測，明星產(chǎn)品Protein A Elisa試劑盒 #ADI-900-057具有以下特點：
高靈敏度：檢測下限低至 9.01 pg/ml（<1 ppm），精準(zhǔn)識別微小殘留；
全面覆蓋：檢測多種Protein A構(gòu)型，無需切換檢測方法；
品牌兼容：適用于GE/Cytiva、Repligen、Milipore 等多種來源的天然/重組Protein A；
高通量檢測：3 小時內(nèi)可檢測出多達(dá) 37 個重復(fù)樣本；
經(jīng)濟實用：成本效益顯著，深受CDMO與藥物研發(fā)企業(yè)信賴。
 
二、宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測

宿主細(xì)胞蛋白（Host cell protein，HCP）是指病毒性疫苗和基因工程藥物中來源于宿主細(xì)胞的蛋白成分，不僅有可能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生抗HCP抗體，引起過敏反應(yīng)，還有可能有“佐劑效應(yīng)”引起機體對蛋白質(zhì)藥物產(chǎn)生抗體。殘留的HCP會存在潛在的安全風(fēng)險，需進(jìn)行嚴(yán)格的檢測。

1、 Elisa法
針對宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測，明星產(chǎn)品HCP Elisa試劑盒可用于測定中國倉鼠卵巢(CHO)，大腸桿菌（E.coli）和HEK293T表達(dá)體系的宿主細(xì)胞蛋白（HCP）污染，具有以下特點：
高靈敏度：檢測限低至10 ng/mL，確保準(zhǔn)確捕捉殘留HCP
廣泛覆蓋：針對CHO、E.coli、HEK293T表達(dá)體系，蛋白質(zhì)覆蓋率超70%，有效降低遺漏風(fēng)險
快速高效：實現(xiàn)高通量檢測，3小時內(nèi)獲取結(jié)果

除此之外，增強型E.coli|360-HCP 和CHOI360-HCP ELISA提供四種不同的抗體類型，科學(xué)家可以快速輕松地為特定工藝選擇最合適的抗體，可提高樣品的回收率。

2、HTRF法
與傳統(tǒng)的多步驟ELISA檢測方法相比，HTRF和AlphaLISA CHO HCP試劑盒具有簡化的工作流程、更優(yōu)越的動態(tài)范圍和更高的靈敏度。該試劑盒也很容易實現(xiàn)自動化，小型化和高通量，可支持384孔板。

HTRF CHO HCP DETECTION KIT技術(shù)原理

該檢測原理是基于HTRF®（均相時間分辨熒光）技術(shù)。如下圖所示，用Eu（供體）標(biāo)記抗體和d2（受體）標(biāo)記抗體。當(dāng)抗體相互靠近時，用光源（激光或閃光燈）激發(fā)供體，觸發(fā)熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)，進(jìn)而在特定波長(665nm)發(fā)出熒光。信號強度與形成的抗原-抗體復(fù)合物的數(shù)量成正比。

AlphaLISA CHO Host Cell Protein Detection Kit技術(shù)原理
   

生物素化的抗CHO抗體與鏈霉親和素包被的AlphALISA供體珠結(jié)合，另一抗CHO抗體與AlphaLISA受體珠結(jié)合。在CHOHCP存在下，供體微珠和受體微珠相互靠近。供體珠的激發(fā)會使得單線態(tài)氧釋放，從而觸發(fā)受體珠產(chǎn)生615nm波長信號。
  

三、宿主細(xì)胞殘留DNA檢測
宿主細(xì)胞殘留核酸由于可能會傳遞腫瘤或病毒相關(guān)基因，存在潛在致癌性和感染性風(fēng)險，
各國藥品監(jiān)督管理機構(gòu)均對生物制品中宿主細(xì)胞DNA的殘留量進(jìn)行了嚴(yán)格的限度控制以規(guī)避風(fēng)險。

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測流程
宿主細(xì)胞殘留DNA檢測流程主要包含宿主細(xì)胞殘留DNA提取（磁珠法）和宿主細(xì)胞殘留DNA定量檢測（熒光探針（TaqMan®）qPCR法）。

 圖 宿主細(xì)胞殘留DNA檢測流程

宿主細(xì)胞殘留核酸提取

宿主細(xì)胞殘留DNA（磁珠法）樣本前處理試劑盒（abs60544）用于生物制品樣本前處理，精準(zhǔn)抽提各種生物制品中宿主細(xì)胞殘留DNA。搭配宿主殘留DNA/DNA片段檢測試劑盒使用。

產(chǎn)品優(yōu)勢：

靈敏度高：靈敏度可達(dá)0.03pg/uL，回收率可達(dá)70-130%，符合國家藥典標(biāo)準(zhǔn)
通用性強：可手動提取、可配合全自動核酸提取儀自動化提取，滿足高通量
適用性強：適用于E.coli、HEK293、Vero、CHO等多種宿主DNA樣本
操作便捷：消化時間僅15min，配合核酸提取儀1h內(nèi)完成整個提取過程
 
產(chǎn)品信息

宿主細(xì)胞殘留核酸/DNA片段檢測

產(chǎn)品優(yōu)勢：
快速便捷：方便操作，1小時出結(jié)果。
穩(wěn)定性高：受環(huán)境影響較小，保質(zhì)期內(nèi)性能穩(wěn)定
精密度高：各濃度檢測值CV<15%
專一性強：考察生物制品生產(chǎn)中常用的DNA對檢測試劑盒的干擾，干擾組應(yīng)與對照組重合，未見干擾。
 
產(chǎn)品信息：
宿主細(xì)胞殘留核酸檢測

四、內(nèi)毒素檢測

細(xì)菌內(nèi)毒素檢測是注射藥品和植入式醫(yī)療器械產(chǎn)品上市前的一項必要安全性測試。目前對于內(nèi)毒素的檢測主要有鱟采血的LAL法，和出于對鱟資源的保護(hù)而興起的基于重組 C 因子的內(nèi)毒素檢測方法。LAL法是從棲生于海洋的節(jié)肢動物“鱟”的藍(lán)色血液中提取變形細(xì)胞溶解物制作而成，方法簡單﹑快速﹑靈敏﹑準(zhǔn)確。然而鱟資源非常有限，重組C因子（rFC）是一種可持續(xù)的替代選擇，該產(chǎn)品使用重組形式的因子C，內(nèi)毒素激活重組因子C蛋白，然后裂解熒光底物產(chǎn)生熒光信號。與傳統(tǒng)的基于LAL的測定相比，rFC測定具有以下優(yōu)點：

內(nèi)毒素檢測特異性，重組技術(shù)消除了鱟試劑中β-1,3-葡聚糖導(dǎo)致的假陽性結(jié)果的干擾
不依賴動物源性成分，提供更高的供應(yīng)安全性
重組表達(dá)生產(chǎn)，產(chǎn)品批間一致性良好
終點熒光測定，不易受到干擾
靈敏度范圍從0.005到5EU/ml
消除了對動物源試劑的依賴，符合3R的替代原則