RNA提取常見問題分析

◆柱子堵塞： 

1. 裂解或勻漿處理不徹底。減少樣品使用量，增加裂解液用量，增加勻漿和裂解 
時間。 
2. 處理樣品太多。 

◆ 得率低： 

1. 裂解或勻漿處理不徹底。減少樣品使用量，增加裂解液用量，增加勻漿和裂解 
時間。 
2. 處理樣品太多。請參考最大處理量。 
3. RNA仍在柱上未洗出。再次洗脫，加入RNase-Free 水后，放置幾分鐘離心。 
4. 洗出液中有酒精。漂洗后應(yīng)再次離心，盡量去除漂洗液。 
5. 未除凈細(xì)胞培養(yǎng)液。收集細(xì)胞時，請注意盡量去除培養(yǎng)液。 
6. 使用RNAstore保存的細(xì)胞:未有效離心。RNAlater密度大于一般的細(xì)胞培養(yǎng) 
液，離心時應(yīng)加大離心力，可以3000×g離心。 

◆ A260/A280比值低： 

洗脫時不使用RNase-Free 水，使用10 mM Tris.Hcl, pH 8.5作為洗脫液。 

◆ RNA降解： 

1. 提取的材料不新鮮。新鮮組織取得后應(yīng)立即置于液氮中或立即放入RNAstore試 
劑中，以保證提取效果。 
2. 處理樣品量過大。 
3. 污染了RNase。 雖然試劑盒中提供的緩沖液都不含RNase，但使用過程中很 
容易污染RNase，應(yīng)小心操作。 

◆ DNA污染： 

1. 處理樣品量過大。 
2. 有些樣品本身DNA含量即較高，可使用DNase處理。得到的RNA溶液可加入 
DNase處理，處理后直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，也可用本試劑盒再進(jìn)行一次純化。