五色多重熒光免疫組化試劑盒助力多維度解析乙肝免疫調控新機制

文獻標題：The core cellular network modulates immune phenotype switching in hepatitis B
發(fā)表期刊：Science Bulletin（IF 21.1）
DOI：https://doi.org/10.1016/j.scib.2025.03.038
核心試劑：五色多重熒光免疫組化試劑盒（abs50013）、檸檬酸鈉-EDTA抗原修復液（abs9249）

一、研究思路：多維度解析乙肝免疫表型轉換的核心邏輯
乙肝病毒感染的臨床異質性極強，不同階段（免疫耐受期 IT、免疫活動期 IA、非活動期 ICI 及急性乙肝 AHB）的免疫狀態(tài)差異顯著，但其核心調控機制尚未完全闡明。本研究團隊以 “臨床樣本分層 - 多組學技術整合 - 功能驗證” 為核心思路，構建了全面的研究體系：

樣本體系：收集 18 例乙肝患者肝活檢樣本、15 例配對外周血樣本（覆蓋 IT/IA/ICI/AHB 四階段），以及健康對照樣本，嚴格排除干擾因素確保樣本純度；

技術矩陣：整合單細胞 RNA-seq、空間轉錄組、多重免疫組化、TCR/BCR 測序、體外 PBMC 刺激等技術，實現(xiàn) “細胞亞群 - 基因表達 - 空間定位 - 功能驗證” 的全鏈條解析；

核心目標：揭示乙肝不同階段肝內(nèi)及外周免疫細胞的表型特征、細胞間互作網(wǎng)絡，明確調控免疫表型轉換的核心通路與分子機制。

關鍵技術流程示意圖：

二、核心研究成果：乙肝免疫調控的三大關鍵發(fā)現(xiàn)
1. CD8+T 細胞亞群分異主導免疫狀態(tài)轉換
研究首次明確肝內(nèi) CD8+T 細胞分為兩大核心亞群：

• GZMK+ CD8+T 細胞：在 AHB 和 IA 階段占比更高，具有肝駐留性和耗竭表型（高表達 CXCR6、PDCD1），通過 FasL/Fas 或 IFN-γ 介導細胞毒性；
• GZMB+ CD8+T 細胞：在 IT 階段富集，依賴穿孔素發(fā)揮細胞毒性，且與臨床炎癥指標呈負相關。

通過偽時間軌跡分析，進一步發(fā)現(xiàn)乙肝特異性 CTL（hpCTL）存在三種細胞狀態(tài)，IA 階段以 FASLG+ State3 為主，IT 階段以 GZMB+PRF1+ State1 為主，為不同階段免疫干預提供了靶點（對應原文圖 S3a、S8）。

2. 多細胞互作網(wǎng)絡調控免疫耐受與激活

• 肝細胞：門脈周圍肝細胞（Hep2）在 IT 階段 HBV 感染率更高，MHC-I 基因高表達但共刺激分子（CD40、CD80）低表達，介導 CD8+T 細胞功能障礙；
• 巨噬細胞：MRC1+CDH5 + 枯否細胞高表達抗原提呈相關分子（HLA、TAP1）及共刺激分子，在 AHB/IA 階段增強 IL-2 信號，可挽救 CD8+T 細胞功能；
• 調控通路：IA 階段 PGE2-EP4 信號通路激活（血漿 PGE2 水平與 ALT 正相關），抑制 CD8+T 細胞細胞毒性；IL-33 + 肝竇內(nèi)皮細胞、DC-SIGN + 巨噬細胞介導的 2 型免疫抑制在 IA 階段顯著增強（對應原文圖 S5、S6）。

3. 臨床關聯(lián)：免疫細胞亞群與疾病進展密切相關
CD8 + 耗竭 T 細胞、Treg、CXCL13+ Tfh 細胞與血漿 ALT 水平、肝組織炎癥分級呈正相關，而 GZMB+ CD8+T 細胞呈負相關，為乙肝臨床預后評估提供了潛在生物標志物（對應原文圖 S11）。

三、Absin 產(chǎn)品賦能關鍵實驗：多重免疫組化的核心工具
本研究中，多重免疫組化技術作為解析肝內(nèi)細胞定位與表型的關鍵手段，離不開 Absin 兩大核心產(chǎn)品的穩(wěn)定支持：
1. 核心產(chǎn)品清單

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品貨號	應用場景
TSA 5-color kit	abs50013	多重免疫組化熒光染色
Citrate-EDTA Antigen Retrieval Solution	abs9249	甲醛固定石蠟切片（FFPE）抗原修復

2. 產(chǎn)品在研究中的核心作用
（1）Citrate-EDTA 抗原修復液（abs9249）：實驗成功的基礎保障
應用環(huán)節(jié)：肝組織 FFPE 切片多重免疫組化前處理；
核心作用：甲醛固定會導致抗原表位交聯(lián)遮蔽，abs9249 通過檸檬酸鹽 - EDTA 緩沖體系，在微波加熱條件下高效修復抗原表位（原文步驟：“transferred to preheated Citrate-EDTA Antigen Retrieval Solution (abs9249, Absin) before being heat-treated using a microwave for 15 minutes”），確保后續(xù)一抗能夠特異性結合靶標分子；
實驗價值：為 CD8、GZMK、GZMB 等關鍵標志物的高效檢測奠定基礎，是免疫染色信號清晰的前提。

（2）TSA 5-color kit（abs50013）：多標志物同步可視化的核心工具
應用環(huán)節(jié)：肝組織中 CD8+T 細胞亞群及功能分子的多重標記；
核心作用：采用酪酰胺信號放大（TSA）技術，可在同一張切片上同時檢測 5 種靶標（CD8、GZMK、GZMB、Transferrin、DAPI），通過不同熒光通道區(qū)分，實現(xiàn)細胞亞群定位與功能表型的同步分析（原文步驟：“paired with TSA 5-color kit (abs50013-20T, Absin). Finally, they were stained with DAPI”）；
實驗價值：清晰呈現(xiàn) GZMK+ CD8+T 細胞、GZMB+ CD8+T 細胞在肝組織中的空間分布，以及與肝細胞、巨噬細胞的共定位關系，為 “細胞互作調控免疫表型” 的結論提供直接可視化證據(jù)（對應原文圖 S2c：CD8+T 細胞亞群染色結果；圖 S4i：肝組織中關鍵分子表達定位）。

3. 對應原文關鍵圖片展示

原文圖片	圖片內(nèi)容	Absin 產(chǎn)品貢獻
圖 S2c	乙肝患者肝組織中 CD8+T 細胞亞群（GZMB+、GZMK+）熒光染色結果	abs9249 保障抗原暴露，abs50013-20T 實現(xiàn)多標志物同步顯色，清晰區(qū)分不同功能 CD8+T 細胞
圖 S4i	肝組織中 AREG、EGFR 等分子的空間表達定位	TSA 試劑盒的高靈敏度熒光信號放大，確保低表達靶標的有效檢測
圖 S1b/d	肝內(nèi)細胞亞群聚類及不同階段占比分析	多重免疫組化結果為單細胞測序的細胞類型注釋提供驗證依據(jù)

四、Absin：科研探索的可靠合作伙伴
本研究通過多維度技術解析乙肝免疫調控機制，其成果的發(fā)表離不開精準高效的實驗工具支持。Absin 的 TSA 多重染色試劑盒與抗原修復液，憑借穩(wěn)定的性能、高效的效果，成功助力研究團隊完成肝組織多標志物的精準檢測，為核心結論的驗證提供了關鍵技術支撐。

在免疫表型分析、腫瘤微環(huán)境解析、傳染病免疫機制等研究領域，Absin 始終以 “提供高品質科研工具” 為核心，持續(xù)優(yōu)化免疫組化、流式檢測、分子生物學等系列產(chǎn)品，助力科研人員突破實驗瓶頸，加速科研成果轉化。

未來，Absin 將繼續(xù)深耕生命科學研究需求，推出更多適配前沿技術的創(chuàng)新產(chǎn)品，與全球科研工作者攜手，探索生命奧秘，推動醫(yī)學進步！

文中使用產(chǎn)品

貨號	名稱	規(guī)格
abs50013	五色多重熒光免疫組化染色試劑盒	20T/50T/100T
abs9249	檸檬酸鈉-EDTA抗原修復液	100mL

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