Filipin與CTxb-FITC助力破解阿爾茨海默病膽固醇代謝與脂筏病理機制
當阿爾茨海默�。ˋD）研究聚焦于 APOE4 介導的神經(jīng)免疫紊亂，當膽固醇堆積、脂筏異常成為破解病理機制的關鍵突破口，你是否在尋找能精準捕捉這些分子變化的實驗工具？
近期《Translational Neurodegeneration》（IF:10.8）一篇題為“TRPV1 alleviates APOE4-dependent microglial antigen presentation and T cell infltration in Alzheimer’s disease”的重磅研究為 AD 機制帶來新洞見：APOE4 通過 ER 應激 - Ca²⁺-SREBP2 通路誘發(fā)微膠質細胞膽固醇堆積，進而增強 MHC II 抗原呈遞與 T 細胞浸潤，而 TRPV1 agonist 可逆轉這一病理過程。值得關注的是，這項研究的核心數(shù)據(jù)支撐，離不開Absin Filipin III（貨號：abs42018484）與Absin CTxb-FITC（貨號：abs80003）的精準助力 —— 這對 “探針組合”，正成為 AD 及神經(jīng)退行性疾病研究的得力助手！
Filipin III：膽固醇代謝異常的 “可視化偵探”
在 AD 病理中，微膠質細胞的膽固醇堆積是觸發(fā)免疫紊亂的 “導火索”。而 Filipin III 作為特異性膽固醇結合熒光探針，能讓這一 “隱形” 病理變化清晰可見：
精準定位，直擊核心：特異性結合細胞內游離膽固醇，通過藍色熒光信號（激發(fā)/發(fā)射波長～355/460 nm）精準標記膽固醇分布，無論是 BV2 細胞內的彌散積累，還是溶酶體中的異常聚集，都能被清晰捕捉。
量化分析，數(shù)據(jù)可靠：在文獻研究中，科研團隊用 50μg/mL Filipin III 對 BV2 細胞染色 2 小時，結合 ImageJ 定量分析，明確證實 “APOE4+PHF 組膽固醇積累顯著高于 APOE3 組，辣椒素干預后可逆轉”，為 “膽固醇堆積是 APOE4 致 AD 的關鍵環(huán)節(jié)” 提供直接證據(jù)。
靈活兼容，場景廣泛：可與溶酶體染料（如 LysoTracker Red）聯(lián)合使用，觀察膽固醇在亞細胞結構的定位；也適用于小鼠腦組織切片，助力體內外實驗數(shù)據(jù)互證，全方位解析膽固醇代謝異常的病理意義。
Filipin III 與 LysoTracker Red 聯(lián)合染色，觀察溶酶體中膽固醇聚集情況
CTxb-FITC：脂筏與抗原呈遞的 “定位導航儀”
脂筏作為細胞膜上的信號平臺，其與 MHC II 分子的結合是抗原呈遞的關鍵步驟。而CTxb-FITC（霍亂毒素B亞基偶聯(lián)FITC），正是解鎖這一機制的 “鑰匙”：
靶向脂筏，精準標記：特異性結合脂筏上的 GM1 神經(jīng)節(jié)苷脂，通過綠色熒光（激發(fā)/發(fā)射波長～495/519 nm）清晰勾勒脂質筏輪廓，為 MHC II 分子的定位分析提供 “坐標系統(tǒng)”。
共定位分析，揭示機制：在文獻研究中，科研團隊將 8μg/mL CTxb-FITC 與 MHC II-PE 抗體聯(lián)合染色（4℃孵育 30 分鐘），通過共聚焦顯微鏡觀察到 “APOE4+PHF 組 MHC II 在脂質筏上的聚集顯著增加，辣椒素可減少這一聚集”，直接證實 “APOE4 通過脂質筏調控 MHC II 抗原呈遞” 的核心機制。
操作便捷，信號穩(wěn)定：無需復雜預處理，固定后直接染色即可獲得穩(wěn)定熒光信號，且與免疫熒光實驗流程兼容，輕松融入現(xiàn)有實驗體系，助力快速獲得高質量共定位數(shù)據(jù)。
ApoE4+PHF 處理及辣椒素干預后，BV2 細胞中 MHC II 在脂筏（CTxb-FITC 標記）上的分布變化
表1 Filipin III 與 CTxb-FITC 實驗操作步驟對照表
| 核心作用 | 1. 特異性結合細胞內膽固醇，通過熒光信號可視化膽固醇分布 2. 定量分析細胞（如 BV2 細胞、小鼠腦微 glia）中膽固醇積累水平 3. 聯(lián)合溶酶體染料（LysoTracker Red）觀察膽固醇在溶酶體中的聚集情況 |
1. 特異性結合細胞膜脂質筏上的 GM1 神經(jīng)節(jié)苷脂，標記脂質筏位置 2. 觀察 MHC II 分子在脂質筏上的定位與聚集，探究抗原呈遞機制 |
| 實驗樣本 | 1. 體外：BV2 小鼠微 glia 細胞系 2. 體內：小鼠腦組織切片（海馬區(qū)） |
體外：BV2 小鼠微 glia 細胞系 |
| 關鍵處理步驟 | 1. 固定：4% 多聚甲醛室溫固定20min（細胞樣本） 2. 洗滌：PBS 洗滌3次，去除固定液 3. 染色：50μg/mL Filipin III（含 10% FBS 的 PBS 配置）室溫孵育2h 4. 聯(lián)合染色（若需）：先加 50nM LysoTracker Red 37℃避光孵育30min，洗滌后再進行 Filipin III 染色 5. 核染色：DAPI 室溫孵育10min，標記細胞核 |
1. 固定：4% 多聚甲醛室溫固定10min 2. 封閉：含 5% 牛血清白蛋白的 PBS 室溫封閉 3. 染色：加入 8μg/mL CTxb-FITC + 2μg/ml MHC II-PE 抗體，4℃孵育 30 分鐘 4. 核染色：DAPI 室溫孵育 10 分鐘，標記細胞核 |
| 成像與分析工具 | 1. 成像：TCS SP8 激光共聚焦顯微鏡（40× 或 63× 物鏡） 2. 分析：ImageJ 軟件量化熒光強度/陽性區(qū)域占比 |
1. 成像：TCS SP8 激光共聚焦顯微鏡（63×1.4 NA 物鏡） 2. 分析：ImageJ 軟件計算 MHC II與CTxb-FITC 的共定位系數(shù) |
| 關鍵實驗參數(shù) | 1. 染液濃度：50μg/mL 2. 孵育時間：2h 3. 孵育溫度：室溫 4. 聯(lián)合染料：LysoTracker Red（50nM，37℃孵育 30 分鐘） |
1. 染液濃度：8μg/mL 2. 孵育時間：30min 3. 孵育溫度：4℃ 4. 聯(lián)合抗體：MHC II-PE（2μg/mL） |
| 實驗結論支撐 | 1. 證明 APOE4 會導致微 glia 中膽固醇積累 2. 驗證辣椒素可通過 TRPV1 抑制膽固醇合成，減少膽固醇積累 |
1. 證明 APOE4 會促進 MHC II 在脂質筏上聚集 2. 驗證辣椒素可降低 MHC II 在脂質筏的定位，抑制抗原呈遞 |
當 AD 研究進入 “分子機制精細化” 時代，精準的實驗工具是突破瓶頸的關鍵。Absin Filipin III (abs42018484)與 CTxb-FITC(abs80003)，已通過高分文獻驗證，為膽固醇代謝、脂筏功能研究提供 “可視化 + 定量化” 解決方案。
引用文獻：
[1]Transl Neurodegener. 2024 Oct 29;13(1):52. doi: 10.1186/s40035-024-00445-6. PMID: 39468688 IF:10.8
[2]Gastroenterology. 2025 Sep;169(4):615-631.e32. doi: 10.1053/j.gastro.2025.03.019. Epub 2025 Mar 28. PMID: 40158738 IF:25.7
[3]Autophagy. 2025 Jun;21(6):1263-1282. doi: 10.1080/15548627.2025.2469129. Epub 2025 Mar 10. PMID: 39988734 IF:14.6
[4] Redox Biol. 2025 Feb:79:103469. doi: 10.1016/j.redox.2024.103469.Epub 2024 Dec 12.PMID: 39700693 IF:10.7
[5]TAntiviral Res. 2023 Aug:216:105662. doi: 10.1016/j.antiviral.2023.105662. Epub 2023 Jun 29. PMID: 37393054 IF:7.6
[6]J Transl Med. 2023 Oct 17;21(1):733. doi: 10.1186/s12967-023-04609-2. PMID: 37848983 IF:7.4
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| 貨號 | 產品名稱 | 規(guī)格 |
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