LUNA-III™自動細(xì)胞計數(shù)儀在細(xì)胞尺寸測量中的應(yīng)用

1、 引言
細(xì)胞尺寸是生物醫(yī)學(xué)研究及生物制造等應(yīng)用中的關(guān)鍵參數(shù)，可反映細(xì)胞健康狀況與質(zhì)量。在生物制造流程中，細(xì)胞尺寸用于評估批次培養(yǎng)或細(xì)胞治療中的原料質(zhì)量，因此自動細(xì)胞計數(shù)儀的精準(zhǔn)測量至關(guān)重要。LUNA-III™自動細(xì)胞計數(shù)儀 繼承了 LUNA™ 系列設(shè)備的標(biāo)準(zhǔn)尺寸分選功能，確保高精度細(xì)胞尺寸測量，并能在計數(shù)過程中及計數(shù)后對細(xì)胞群體進行分類分析。本研究展示了LUNA-III™自動細(xì)胞計數(shù)儀在六種NIST可溯源粒徑標(biāo)準(zhǔn)及3T3 細(xì)胞系上的測量精度和尺寸分選能力。

2、 方法與材料
2.1 細(xì)胞系與試劑
實驗使用3T3細(xì)胞系，其培養(yǎng)基為含10%胎牛血清和1%的DMEM。細(xì)胞存活率評估采用0.4%臺盼藍(lán)（貨號 T13101）。此外為了驗證尺寸測量的精度，實驗使用了六種NIST可溯源粒徑標(biāo)準(zhǔn)（9.98、20.85、30.04、43.33、50.00和57.43 µm）。

2.2 基于NIST可溯源粒徑標(biāo)準(zhǔn)的精度驗證
NIST可溯源粒徑標(biāo)準(zhǔn)由美國國家標(biāo)準(zhǔn)與技術(shù)研究院（NIST）提供，可作為公認(rèn)的測量基準(zhǔn)。使用這些標(biāo)準(zhǔn)顆粒評估LUNA-III™自動細(xì)胞計數(shù)儀的測量精度，結(jié)果表明其尺寸測量準(zhǔn)確度達 95.2% 以上，進一步驗證了其在尺寸測量中的高精度（圖1）。 圖 1：（A）LUNA-III™自動細(xì)胞計數(shù)儀計數(shù)的NIST可溯源粒徑標(biāo)準(zhǔn)（NT27N、NT30N、NT32N、NT33N、NT34N、#64200）圖像，紅色圓圈標(biāo)示檢測出的顆粒。（B）表格對比NIST標(biāo)準(zhǔn)粒徑尺寸與點成LUNA-III™測量值及其精度百分比。（C）散點圖顯示了LUNA-III™自動細(xì)胞計數(shù)儀測量值與NIST標(biāo)準(zhǔn)值的線性關(guān)系，R²值達0.9999，表明其具備極高的線性度和準(zhǔn)確性。

2.3 細(xì)胞尺寸測量
為了評估LUNA-III™自動細(xì)胞計數(shù)儀的尺寸測量準(zhǔn)確性，我們混合了六種NIST可溯源粒徑樣本，并將計數(shù)范圍設(shè)定在 1 µm 至 90 µm 之間。計數(shù)完成后，系統(tǒng)生成細(xì)胞濃度與尺寸分布直方圖，并精準(zhǔn)分類各尺寸標(biāo)準(zhǔn)顆粒。利用靈活的尺寸分選功能，可在計數(shù)后立即調(diào)整尺寸范圍，對目標(biāo)尺寸進行精確標(biāo)定，使測量準(zhǔn)確度超過98%。
2.4 3T3 細(xì)胞尺寸測量
為了評估LUNA-III™自動細(xì)胞計數(shù)儀根據(jù)尺寸篩選3T3細(xì)胞（已知尺寸約18 µm）的能力，我們設(shè)定了多個尺寸分選范圍7~24 µm、1~11 µm、12~24 µm、16~20 µm（圖 3）。結(jié)果顯示，LUNA-III™自動細(xì)胞計數(shù)儀能精準(zhǔn)檢測并篩選符合各尺寸范圍的3T3細(xì)胞，同時相應(yīng)的直方圖也清晰展示了細(xì)胞尺寸分布情況，證明其在不同尺寸范圍內(nèi)均能實現(xiàn)可靠、精準(zhǔn)的測量。 圖 3：LUNA-III™自動細(xì)胞計數(shù)儀計數(shù)的3T3細(xì)胞圖像，顯示細(xì)胞在 7~24 µm、1~11 µm、12~24 µm和16~20 µm之間的尺寸分選情況，橙色圓圈標(biāo)示檢測到的細(xì)胞。相應(yīng)直方圖展示了各尺寸范圍內(nèi)的細(xì)胞分布情況。

3、 結(jié)論
LUNA-III™自動細(xì)胞計數(shù)儀可提供精準(zhǔn)、可靠的細(xì)胞尺寸測量。在NIST可溯源粒徑標(biāo)準(zhǔn)的驗證下，其測量準(zhǔn)確度達95.2%以上，并成功對混合粒徑顆粒及3T3細(xì)胞進行精準(zhǔn)分類和尺寸分選，準(zhǔn)確度超過98%。