青梅來源胞外囊泡樣顆粒抑制炎癥小體活化緩解實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的機(jī)制研究
潰瘍性結(jié)腸炎（UC）為慢性復(fù)發(fā)性炎癥性腸病，長(zhǎng)期病程可增高結(jié)直腸癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)�，F(xiàn)有治療藥物存在耐藥性與嚴(yán)重不良反應(yīng)等局限，亟需研發(fā)安全有效的新型干預(yù)策略。
NLRP3 炎癥小體過度激活是 UC 發(fā)病的核心機(jī)制，可通過介導(dǎo) caspase-1 活化，促進(jìn) IL-1β、IL-18 釋放，進(jìn)而加劇腸道炎癥損傷。藥食同源藥材青梅（Prunus mume）傳統(tǒng)上具有調(diào)節(jié)胃腸功能的作用，但其活性物質(zhì)及作用靶點(diǎn)尚未明確。
南京中醫(yī)藥大學(xué)團(tuán)隊(duì)首次證實(shí)，青梅來源胞外囊泡樣顆粒（PM-EVLPs）口服后可特異性靶向炎癥結(jié)腸組織，通過其負(fù)載的 miR159 阻斷 NEK7-NLRP3 相互作用，抑制 NLRP3 炎癥小體活化，顯著改善實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎，為 UC 治療提供了新型天然納米藥物候選。
標(biāo)題：Prunus mume derived extracellular vesicle-like particles alleviate experimental colitis via disrupting NEK7-NLRP3 interaction and inflammasome activation
中文譯名：青梅來源胞外囊泡樣顆粒通過阻斷 NEK7-NLRP3 相互作用、抑制炎癥小體活化緩解實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎
期刊：Journal of Nanobiotechnology
影響因子：12.6
發(fā)表時(shí)間：2025 年 7 月 21 日
💯研究思路💯
首先采用超速離心聯(lián)合蔗糖梯度離心法分離純化青梅來源胞外囊泡樣顆粒（PM-EVLPs），并完成其表征分析；其次利用DSS及TNBS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎模型，系統(tǒng)評(píng)估PM-EVLPs的體內(nèi)治療效能及安全性；通過體內(nèi)生物分布實(shí)驗(yàn)與細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)，明確PM-EVLPs的靶向組織及靶細(xì)胞特異性；隨后在細(xì)胞水平深入探究PM-EVLPs對(duì)NLRP3炎癥小體激活的調(diào)控作用及潛在分子機(jī)制；通過成分分離與miRNA篩選技術(shù)，鑒定PM-EVLPs中的核心活性成分；最后驗(yàn)證關(guān)鍵活性miRNA的體內(nèi)治療效應(yīng)，完善作用機(jī)制閉環(huán)。
💯研究結(jié)果💯
1.PM-EVLPs的分離純化與表征
2.PM-EVLPs口服給藥對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的緩解作用 
3.PM-EVLPs特異性靶向結(jié)腸巨噬細(xì)胞
采用梯度離心聯(lián)合蔗糖密度梯度純化法，從青梅果汁中分離獲得青梅來源胞外囊泡樣顆粒（PM-EVLPs）（Fig.1A）。納米顆粒追蹤分析（NTA）顯示，其平均粒徑約為124nm；透射電子顯微鏡（TEM）觀察可見典型杯狀結(jié)構(gòu)；zeta電位檢測(cè)結(jié)果約為-27mV（Fig.1B-D）。成分分析表明，PM-EVLPs主要包含miRNA、蛋白質(zhì)及脂質(zhì)，其中miRNA占比最高，平均長(zhǎng)度約20nt（Fig.1E-G）。此外，PM-EVLPs在模擬胃腸液中具有良好穩(wěn)定性，具備口服給藥的應(yīng)用潛力。
2.PM-EVLPs口服給藥對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的緩解作用
在DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎模型中，口服PM-EVLPs可呈劑量依賴性改善小鼠體重下降趨勢(shì)，降低疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI），增加結(jié)腸長(zhǎng)度，同時(shí)顯著降低髓過氧化物酶（MPO）活性、減少中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)（Fig.2B-H）。高分辨率內(nèi)鏡及組織病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，PM-EVLPs能夠有效減輕結(jié)腸上皮損傷、黏膜水腫及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度（Fig.2F-G）。
在TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎模型中，PM-EVLPs同樣表現(xiàn)出顯著的治療效應(yīng)，可提高小鼠存活率，明顯改善結(jié)腸組織損傷及腸道炎癥反應(yīng)（Fig.2J-P）。安全性評(píng)估結(jié)果表明，PM-EVLPs對(duì)小鼠主要臟器無明顯毒性作用，且不會(huì)影響機(jī)體免疫細(xì)胞比例，提示其口服給藥具有良好的生物安全性。
3.PM-EVLPs特異性靶向結(jié)腸巨噬細(xì)胞
體內(nèi)生物分布顯示，DiR標(biāo)記的PM-EVLPs口服后在DSS結(jié)腸炎小鼠中優(yōu)先富集于炎癥結(jié)腸組織，24h達(dá)峰值，48h基本清除（Fig.3A）。免疫熒光顯示其主要定位于結(jié)腸黏膜層固有層（Fig.3B）。細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)表明，巨噬細(xì)胞（BMDMs和THP-1細(xì)胞）對(duì)PM-EVLPs的攝取效率顯著高于T細(xì)胞（Fig.3C-D）。結(jié)腸組織共定位實(shí)驗(yàn)證實(shí)，PM-EVLPs可被F4/80⁺巨噬細(xì)胞內(nèi)化（Fig.3E）。
4.巨噬細(xì)胞是PM-EVLPs發(fā)揮抗結(jié)腸炎作用的關(guān)鍵靶細(xì)胞
5.PM-EVLPs 選擇性抑制巨噬細(xì)胞 NLRP3 炎癥小體激活
氯膦酸脂質(zhì)體清除小鼠巨噬細(xì)胞后，PM-EVLPs對(duì)DSS及TNBS誘導(dǎo)結(jié)腸炎的保護(hù)作用顯著減弱，表現(xiàn)為DAI評(píng)分升高、結(jié)腸縮短、炎癥浸潤(rùn)加重（Fig.4A-G、H-N），證實(shí)巨噬細(xì)胞是PM-EVLPs發(fā)揮抗結(jié)腸炎效應(yīng)的關(guān)鍵靶細(xì)胞。
5.PM-EVLPs 選擇性抑制巨噬細(xì)胞 NLRP3 炎癥小體激活
PM-EVLPs 可顯著降低結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸巨噬細(xì)胞中 cleaved caspase-1、IL-1β 及 IL-18 的表達(dá)（Fig.5A-B），但對(duì)結(jié)腸上皮細(xì)胞 NLRP3 炎癥小體無明顯抑制作用（Fig.5C-D）。體外實(shí)驗(yàn)顯示，PM-EVLPs 可抑制 LPS+ATP、尼日利亞菌素或 MSU 誘導(dǎo)的 BMDMs、THP-1 細(xì)胞 NLRP3 炎癥小體激活，減少炎癥因子分泌（Fig.5E-J），且對(duì) AIM2、NLRP1、NLRC4 炎癥小體無明顯影響，具有選擇性。
6.PM-EVLPs 通過破壞 NEK7-NLRP3 相互作用抑制炎癥小體組裝
PM-EVLPs 不影響 NLRP3 炎癥小體激活的啟動(dòng)信號(hào)（NF-κB 通路），對(duì)線粒體 ROS 生成、K⁺外流及 Ca²⁺內(nèi)流亦無顯著作用。Co-IP 結(jié)果顯示，PM-EVLPs 可抑制 ASC 寡聚化及 NLRP3/ASC/pro-caspase-1 復(fù)合物形成（Fig.6A-B）。CETSA 與 SIP 實(shí)驗(yàn)表明，PM-EVLPs 不直接結(jié)合 NLRP3（Fig.6C-D）。PLA、BiFC 及免疫熒光實(shí)驗(yàn)證實(shí)，PM-EVLPs 可顯著抑制 NEK7 與 NLRP3 的相互作用（Fig.6E-L），進(jìn)而阻斷炎癥小體組裝。
7.PM-EVLPs 中的 miR159 是抑制 NLRP3 炎癥小體的關(guān)鍵成分
8.miR159 體內(nèi)給藥可緩解實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎
成分篩選顯示，DNase I/RNase 處理可消除 PM-EVLPs 的抗炎活性，而蛋白酶 K 或脂質(zhì)提取對(duì)其活性無明顯影響（Fig.7A-B），提示活性成分為 RNA。miRNA 測(cè)序共鑒定出 94 種 miRNA，其中 miR159、miR482 等豐度最高（Fig.7C）。體外實(shí)驗(yàn)表明，僅 miR159 模擬物可重現(xiàn) PM-EVLPs 的作用，呈劑量依賴性抑制 NLRP3 炎癥小體激活，降低 IL-1β、IL-18 分泌（Fig.7D-G）。miR159 不影響 NF-κB 與 MAPK 通路，可抑制 NEK7-NLRP3 相互作用及炎癥小體組裝（Fig.7H-L）；miR159 抑制劑可逆轉(zhuǎn) PM-EVLPs 的抗炎效應(yīng)（Fig.7M）。
8.miR159 體內(nèi)給藥可緩解實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎
miR159 激動(dòng)劑口服給藥可呈劑量依賴性改善 DSS 誘導(dǎo)結(jié)腸炎小鼠的體重下降、DAI 升高及結(jié)腸縮短，減輕結(jié)腸上皮損傷與炎癥浸潤(rùn)（Fig.8A-H）。在 TNBS 模型中，miR159 激動(dòng)劑同樣可提高小鼠存活率，改善結(jié)腸炎癥與組織損傷（Fig.8I-O），證實(shí) miR159 是 PM-EVLPs 發(fā)揮抗結(jié)腸炎作用的關(guān)鍵活性成分。
💯文章總結(jié)💯
1. 首次從青梅中分離鑒定出具有抗結(jié)腸炎活性的PM-EVLPs，其口服給藥安全有效；
2. 明確PM-EVLPs可特異性靶向炎癥結(jié)腸巨噬細(xì)胞，而非其他免疫細(xì)胞或上皮細(xì)胞；
3. 闡明PM-EVLPs通過破壞NEK7-NLRP3相互作用，選擇性抑制NLRP3炎癥小體激活，對(duì)其他炎癥小體無影響；
4. 鑒定miR159為PM-EVLPs的關(guān)鍵活性成分，其單獨(dú)給藥即可發(fā)揮抗結(jié)腸炎治療作用。
該研究明確了青梅抗結(jié)腸炎的物質(zhì)基礎(chǔ)與分子機(jī)制，為UC治療提供了新型天然納米藥物，同時(shí)為植物來源EVLPs在炎癥性疾病中的應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)支撐。
本文核心創(chuàng)新在于“藥食同源+納米醫(yī)學(xué)”的跨界結(jié)合：以傳統(tǒng)藥用水果青梅為原料，分離天然納米載體PM-EVLPs，兼具良好生物相容性與靶向性；聚焦NLRP3炎癥小體關(guān)鍵靶點(diǎn)，層層遞進(jìn)闡明其通過miR159破壞NEK7-NLRP3相互作用的獨(dú)特機(jī)制，為UC治療提供了新思路。
💯結(jié)腸炎相關(guān)重點(diǎn)炎癥因子💯
| 分類 | 指標(biāo)（因子） | 因子作用 |
|---|---|---|
| 經(jīng)典促炎細(xì)胞因子 | TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17A、IFN-γ、IL-23、IL-18 | 驅(qū)動(dòng)腸道炎癥核心，誘導(dǎo)腸上皮凋亡、破壞腸屏障、招募免疫細(xì)胞、放大炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，是結(jié)腸炎黏膜損傷與慢性化的關(guān)鍵介質(zhì) |
| 趨化因子 | CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL20、CXCL1、CXCL2、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL11 | 特異性招募單核 / 巨噬細(xì)胞、T 細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等免疫細(xì)胞向腸黏膜炎癥部位浸潤(rùn)，決定炎癥分布與浸潤(rùn)強(qiáng)度 |
| 抗炎 / 調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子 | IL-10、TGF-β、IL-4、IL-13、IL-35、IL-27 | 抑制促炎因子釋放、調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞分化、維持腸道免疫耐受，拮抗腸道炎癥，其表達(dá)不足或功能缺陷會(huì)導(dǎo)致炎癥失控 |
| 炎癥小體相關(guān)因子 | NLRP3、NLRP6、NLRC4、Caspase-1 | 感知腸道損傷與病原信號(hào)，激活下游促炎因子（IL-1β、IL-18）成熟釋放，啟動(dòng)并放大腸道初始炎癥反應(yīng) |
| 腸道屏障與損傷相關(guān)因子 | ZO-1、Occludin、Claudin-1、MLCK、HMGB1、iNOS、COX-2 | 調(diào)控腸黏膜緊密連接完整性，反映腸屏障損傷程度；介導(dǎo)氧化應(yīng)激、組織損傷，參與炎癥放大與黏膜修復(fù)失衡 |
| 髓系細(xì)胞相關(guān)介質(zhì) | MMP-2、MMP-9、MPO、ROS、NO、LTB4 | 降解腸道細(xì)胞外基質(zhì)加重組織潰瘍，標(biāo)記中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)程度，介導(dǎo)氧化損傷與脂質(zhì)炎癥介質(zhì)釋放，加劇黏膜破壞 |
💯結(jié)腸炎相關(guān)因子檢測(cè)哪個(gè)公司有？💯
LabEx樂備實(shí)提供Luminex、MSD等多因子檢測(cè)技術(shù)，可助力檢測(cè)結(jié)腸炎相關(guān)炎癥因子指標(biāo)：
| 貨號(hào) | 產(chǎn)品名 | 指標(biāo) |
| LXLBM31-1 | 小鼠趨化因子-31因子Panel | BCA-1/CXCL13,CTACK/CCL27,ENA-78/CXCL5,Eotaxin/CCL11,Eotaxin-2/CCL24,Fractalkine/CX3CL1,GM-CSF,I-309/CCL1,IFN-γ,IL-1β,IL-2,IL-4,IL-6,IL-10,IL-16,IP-10/CXCL10,I-TAC/CXCL11,KC/CXCL1,MCP-1/CCL2,MCP-3/CCL7,MCP-5/CCL12,MDC/CCL22,MIP-1α/CCL3,MIP-1β/CCL4,MIP-3α/CCL20,MIP-3β/CCL19,RANTES/CCL5,SCYB16/CXCL16,SDF-1α/CXCL12,TARC/CCL17,TNF-α |
| LXLBH10-1 | 人炎癥10因子Panel | IL-1 β/IL-1F2，IL-2，IL-4，IL-6 ,IL-8/CXCL8，IL-10，IL-12 p70，IL-13，TNF-α，IFN-γ |
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樂備實(shí)（上海優(yōu)寧維生物科技股份有限公司旗下全資子公司），是國(guó)內(nèi)專注于提供高質(zhì)量蛋白檢測(cè)以及組學(xué)分析服務(wù)的實(shí)驗(yàn)服務(wù)專家，自2018年成立以來，樂備實(shí)不斷尋求突破，公司的服務(wù)技術(shù)平臺(tái)已擴(kuò)展到單細(xì)胞測(cè)序、空間多組學(xué)、流式檢測(cè)、超敏電化學(xué)發(fā)光、Luminex多因子檢測(cè)、抗體芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、PLA蛋白互作、多色免疫組化、DSP空間多組學(xué)等30多個(gè)，建立起了一套涵蓋基因、蛋白、細(xì)胞以及組織水平實(shí)驗(yàn)的完整檢測(cè)體系。
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