借助多技術(shù)聯(lián)用解鎖 T 細(xì)胞活化研究新范式

在免疫治療和細(xì)胞療法快速發(fā)展的當(dāng)下，精準(zhǔn)量化 T 細(xì)胞活化與增殖成為科研核心需求。傳統(tǒng)鉻釋放實(shí)驗(yàn)不僅放射性風(fēng)險(xiǎn)高，還難以提供全面的細(xì)胞功能信息。今天就為大家介紹一種更高效的研究方案——結(jié)合成像、發(fā)光和 ELISA 技術(shù)的多參數(shù)評(píng)估方法，搭配安捷倫專(zhuān)業(yè)設(shè)備，輕松破解 T 細(xì)胞研究難題！
 
 
T 細(xì)胞是適應(yīng)性免疫的核心，其活化狀態(tài)直接反映免疫功能，對(duì)免疫治療開(kāi)發(fā)至關(guān)重要。但傳統(tǒng)方法存在明顯局限：

• 放射性風(fēng)險(xiǎn)：如鉻釋放實(shí)驗(yàn)需使用放射性材料，安全性低；
• 信息單一：僅能評(píng)估細(xì)胞殺傷等部分功能，無(wú)法全面呈現(xiàn)細(xì)胞動(dòng)態(tài)；
• 通量不足：難以適配現(xiàn)代高通量實(shí)驗(yàn)需求。

 
IL-2（白細(xì)胞介素-2）作為 T 細(xì)胞的關(guān)鍵“激活信號(hào)”，其作用機(jī)制復(fù)雜——通過(guò)結(jié)合 IL-2 受體（IL-2Rα/β/γ 三聚體），激活 JAK-STAT、mTORC1 等多條通路調(diào)控蛋白質(zhì)合成、糖酵解、膽固醇合成等過(guò)程，從而調(diào)控細(xì)胞增殖、代謝及細(xì)胞因子分泌（圖 1 和圖 2）。因此需要更全面的技術(shù)，才能完整捕捉 T 細(xì)胞的活化過(guò)程。
   
  
研究團(tuán)隊(duì)采用“細(xì)胞成像+發(fā)光檢測(cè)+ELISA”三技術(shù)聯(lián)用策略，分別從細(xì)胞形態(tài)、代謝活性、細(xì)胞因子分泌三個(gè)核心維度，實(shí)現(xiàn) T 細(xì)胞活化的精準(zhǔn)量化，具體方案如下：
 
1. 細(xì)胞增殖評(píng)估（細(xì)胞成像+發(fā)光檢測(cè)雙驗(yàn)證） 
  將 EpCAM 特異性 CAR-T 細(xì)胞接種到安捷倫 96 孔黑邊透明底板（PN 204626-100），加入不同濃度 IL-2 培養(yǎng) 5 天；

• 通過(guò)成像技術(shù)直接觀察細(xì)胞形態(tài)并計(jì)數(shù)，獲取細(xì)胞數(shù)量變化；
• 取部分細(xì)胞轉(zhuǎn)移至白色微孔板，用 CellTiter-Glo 發(fā)光法檢測(cè)細(xì)胞活力。

  （1）當(dāng)與 100ng/mL 的 IL-2 孵育五天后，CAR T 細(xì)胞的數(shù)量增加（成像計(jì)數(shù)）（圖 3）；
（2）100ng/mL IL-2 處理組的 CAR-T 細(xì)胞活力（發(fā)光信號(hào)）顯著高于無(wú) IL-2 組（p≤0.0001），且 IL-2 在測(cè)試濃度范圍內(nèi)（0.1-100ng/mL）均能有效激活細(xì)胞活力（圖 3 和圖 4）；
（3）發(fā)光法比單純細(xì)胞計(jì)數(shù)更靈敏，能更早捕捉 T 細(xì)胞活化的代謝變化。  
2. 細(xì)胞激活-細(xì)胞因子分泌分析（ELISA 精準(zhǔn)定量） 
  將人淋巴細(xì)胞分為兩組（CD3/CD28 激活組 vs 未激活組），均加入 10ng/mL IL-2 培養(yǎng) 5 天，每日收集上清，用 ELISA 檢測(cè) IFN-γ 和 TNF-α 濃度；
 
關(guān)鍵結(jié)果
（1）激活組 24 小時(shí)內(nèi) IFN-γ 濃度即達(dá) 2000pg/mL 以上，3 天后穩(wěn)定在 5000pg/mL 左右（圖 5）；
（2）TNF-α 分泌趨勢(shì)相似，激活組濃度最高達(dá) 8000pg/mL 以上（圖 6）；
（3）未激活組 5 天內(nèi)幾乎檢測(cè)不到這兩種細(xì)胞因子，且兩組細(xì)胞增殖速率無(wú)差異（圖 7），排除細(xì)胞數(shù)量對(duì)細(xì)胞因子濃度的干擾。

 
 
Cytation 系列細(xì)胞成像檢測(cè)分析系統(tǒng)正是這套多技術(shù)聯(lián)用方案高效研究的核心工具，其優(yōu)勢(shì)可總結(jié)為 3 點(diǎn)：

1. 一站式滿足多技術(shù)需求

• Cytation 系列（Cytation 1/5/7/C10）兼具成像和多模式酶標(biāo)檢測(cè)功能，無(wú)需在不同設(shè)備間轉(zhuǎn)移樣本：
• 成像模塊：支持明場(chǎng)、熒光成像及分析，可直接觀察細(xì)胞形態(tài)、計(jì)數(shù)，捕捉 T 細(xì)胞活化的形態(tài)學(xué)變化；
• 酶標(biāo)模塊：兼容吸收光，熒光，發(fā)光等多種檢測(cè)模式，一次實(shí)驗(yàn)獲取細(xì)胞活力、細(xì)胞因子濃度等多維度數(shù)據(jù)。

 
2. 適配高通量與活細(xì)胞研究

• 兼容 6-1536 孔板，滿足高通量藥物篩選的實(shí)驗(yàn)需求；
• 與 BioSpa 自動(dòng)細(xì)胞培養(yǎng)箱聯(lián)用，實(shí)現(xiàn)多達(dá) 8 塊孔板活細(xì)胞長(zhǎng)期動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，可實(shí)時(shí)追蹤 T 細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中的增殖、活化變化，避免樣本處理帶來(lái)的誤差。

 
3. 數(shù)據(jù)可靠，結(jié)果可重復(fù)

• 設(shè)備性能穩(wěn)定，成像分辨率高、酶標(biāo)檢測(cè)靈敏度強(qiáng)（如發(fā)光法可精準(zhǔn)區(qū)分低濃度 IL-2 的激活效應(yīng)）；
• 適配標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)流程，數(shù)據(jù)重復(fù)性好，為免疫治療研發(fā)、藥物篩選等提供可靠支持。

 
結(jié)合成像、發(fā)光和基于 ELISA 的檢測(cè)，Cytation 為研究人員提供了一個(gè)強(qiáng)大高效、適應(yīng)性強(qiáng)的工具，多維度量化 T 細(xì)胞活化過(guò)程。
 
如果你正在從事免疫相關(guān)研究，想要突破傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)的局限，不妨試試安捷倫這套“成像+發(fā)光+ELISA”的多參數(shù)方案，讓 Cytation 和 BioSpa 系統(tǒng)成為你的科研助力！
 

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