“多重ELISA”之稱的Luminex液相芯片技術(shù)綜述

一、技術(shù)原理概述
Luminex液相芯片檢測(cè)技術(shù)是基于微球編碼與流式檢測(cè)原理建立的高通量蛋白分析方法。其核心技術(shù)在于利用聚苯乙烯微球（或磁性微球）作為固相載體，通過兩種熒光染料以不同比例進(jìn)行光譜編碼，從而獲得多達(dá)100種具有獨(dú)特?zé)晒馓卣鞯奈⑶蝮w系。每種編碼微球表面均可共價(jià)偶聯(lián)針對(duì)特定抗原的捕獲抗體，形成具有特異性識(shí)別能力的檢測(cè)單元。

在實(shí)際應(yīng)用中，可將針對(duì)不同目標(biāo)蛋白的編碼微球混合，與待測(cè)樣本共同孵育，樣本中的靶分子將特異性地與相應(yīng)微球表面的捕獲抗體結(jié)合。隨后，加入熒光標(biāo)記的檢測(cè)抗體完成“三明治”復(fù)合物的構(gòu)建，實(shí)現(xiàn)在單一反應(yīng)體系中同步完成多達(dá)100種目標(biāo)分子的檢測(cè)。

檢測(cè)時(shí)，儀器通過雙激光系統(tǒng)分別對(duì)微球編碼和報(bào)告熒光信號(hào)進(jìn)行識(shí)別：第一束激光判定微球種類，對(duì)應(yīng)目標(biāo)蛋白的身份；第二束激光測(cè)定報(bào)告分子的熒光強(qiáng)度，反映該蛋白在樣本中的含量，從而實(shí)現(xiàn)定量分析。因此，該技術(shù)借助微球編碼與流式信號(hào)采集策略，可在單次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)完成多重蛋白指標(biāo)的高通量檢測(cè)。

Luminex技術(shù)具備與酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）相似的檢測(cè)原理，但實(shí)現(xiàn)了多重化與高通量的顯著提升，其檢測(cè)靈敏度可達(dá)皮克（pg）級(jí)別，并支持絕對(duì)定量分析。目前該技術(shù)已廣泛應(yīng)用于細(xì)胞因子、趨化因子、生長(zhǎng)因子及轉(zhuǎn)錄因子等超過260種蛋白的檢測(cè)，亦可用于基因表達(dá)分析，在生物醫(yī)學(xué)研究、臨床診斷及藥物開發(fā)等領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。

二、工作原理與檢測(cè)流程
Luminex液相芯片技術(shù)是基于熒光編碼微球的高通量多重蛋白檢測(cè)平臺(tái)。該技術(shù)采用多種經(jīng)不同熒光組合編碼的微球作為固相載體，其表面預(yù)先包被針對(duì)特定分析物的捕獲抗體。借助該體系，可在單個(gè)反應(yīng)孔內(nèi)同時(shí)實(shí)現(xiàn)多達(dá)100種分析物的同步檢測(cè)，結(jié)合96孔板形式，顯著提升檢測(cè)通量，并達(dá)到精確定量蛋白水平。

檢測(cè)流程與原理
👉第一步：目標(biāo)分析物捕獲
將待測(cè)樣品加入預(yù)先混合的、攜帶不同熒光編碼的微球體系中。每種微球表面固定有相應(yīng)分析物的特異性捕獲抗體。在孵育過程中，樣本中的目標(biāo)分析物與微球表面的捕獲抗體發(fā)生特異性結(jié)合，實(shí)現(xiàn)初步分離與富集。

👉第二步：檢測(cè)抗體標(biāo)記與信號(hào)放大
加入經(jīng)生物素標(biāo)記的分析物特異性檢測(cè)抗體，使其與已捕獲的分析物結(jié)合，形成“捕獲抗體-分析物-檢測(cè)抗體”夾心復(fù)合物。隨后引入偶聯(lián)藻紅蛋白（PE）的鏈霉親和素，利用其與生物素的高親和力結(jié)合，完成信號(hào)放大體系的構(gòu)建。

👉第三步：流式信號(hào)采集與定量分析
反應(yīng)復(fù)合物通過雙激光流式檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行分析。以Luminex®100™或Luminex®200™分析儀為例：第一束激光識(shí)別微球的熒光編碼，從而判定所檢測(cè)的分析物種類；第二束激光測(cè)定PE報(bào)告熒光的強(qiáng)度，該信號(hào)與分析物的結(jié)合量成正比，據(jù)此實(shí)現(xiàn)各目標(biāo)蛋白的精確定量。

除上述系統(tǒng)外，亦可采用Luminex MAGPIX®分析儀對(duì)磁性編碼微球進(jìn)行檢測(cè)。該系統(tǒng)通過磁場(chǎng)固定微球，并利用兩個(gè)發(fā)光二極管（LED）分別激發(fā)微球編碼熒光與PE報(bào)告熒光，再經(jīng)CCD相機(jī)對(duì)每孔進(jìn)行成像，最終實(shí)現(xiàn)信號(hào)的同步采集與定量分析。  

三、技術(shù)優(yōu)勢(shì)與應(yīng)用范圍
Luminex液相芯片技術(shù)具備顯著的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，主要體現(xiàn)于以下幾個(gè)方面：
👍多重檢測(cè)能力：該技術(shù)支持在同一反應(yīng)體系中同時(shí)檢測(cè)多達(dá)100種生物靶標(biāo)，有效提升了實(shí)驗(yàn)效率與信息產(chǎn)出。
👍樣本節(jié)約性：所需樣品體積低，僅需25μL即可完成多重檢測(cè)，適用于樣本量有限的研究場(chǎng)景。
👍高效省時(shí)：典型的多因子檢測(cè)流程可在約4小時(shí)內(nèi)完成，大幅縮短實(shí)驗(yàn)周期。
👍高靈敏度與精確定量：檢測(cè)靈敏度高，定量下限可達(dá)0.1 pg/mL，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)低豐度蛋白的準(zhǔn)確定量分析。

在樣本適應(yīng)性方面，本技術(shù)適用于多種生物液體樣本，包括血清、血漿、細(xì)胞或組織裂解液、腦脊液以及支氣管肺泡灌洗液等。

其應(yīng)用領(lǐng)域廣泛，主要包括：
👍免疫學(xué)研究：涵蓋免疫調(diào)控、炎癥反應(yīng)、心血管疾病、腫瘤微環(huán)境、腎毒性評(píng)估、代謝研究、神經(jīng)科學(xué)及細(xì)胞間相互作用等研究方向。
👍分析物類型：可檢測(cè)的蛋白類別豐富，包括但不限于細(xì)胞因子、炎癥因子、趨化因子、粘附因子、脂肪因子、血管生成相關(guān)蛋白、腫瘤標(biāo)志物、基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑等。

四、總結(jié)
Luminex液相芯片技術(shù)通過將微球編碼技術(shù)與流式檢測(cè)原理相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了蛋白質(zhì)多重檢測(cè)的重大突破。該技術(shù)不僅保持了傳統(tǒng)免疫檢測(cè)方法的高特異性與靈敏度，更在多指標(biāo)同步分析、樣本需求量、檢測(cè)通量和實(shí)驗(yàn)效率方面展現(xiàn)出顯著優(yōu)勢(shì)，已成為現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究中重要的高通量蛋白分析工具，在基礎(chǔ)研究、臨床診斷和藥物開發(fā)等多個(gè)領(lǐng)域發(fā)揮著關(guān)鍵作用。

五、多重ELISA之稱的Luminex檢測(cè)服務(wù)哪個(gè)公司有？
LabEx為您提供被譽(yù)為“多重ELISA”的Luminex液相芯片檢測(cè)服務(wù)。該技術(shù)基于微球編碼與流式檢測(cè)原理，可在單次實(shí)驗(yàn)中，僅用微量樣本即可同時(shí)精準(zhǔn)定量數(shù)十至上百種目標(biāo)蛋白（如細(xì)胞因子、趨化因子、生長(zhǎng)因子等），實(shí)現(xiàn)了傳統(tǒng)ELISA的高通量升級(jí)。我們的服務(wù)涵蓋從方案設(shè)計(jì)、樣本前處理、多重檢測(cè)到高級(jí)生物信息學(xué)分析的完整流程，兼具高靈敏度、寬動(dòng)態(tài)范圍和優(yōu)異的重復(fù)性。