O-Propargyl-Puromycin在點(diǎn)擊化學(xué)介導(dǎo)的新生蛋白質(zhì)研究分析中的應(yīng)用

O-Propargyl-Puromycin（OPP，OP-Puro，AbMole，M14749）是嘌呤霉素（Puromycin）的衍生物，其末端帶有炔烴基團(tuán)（Alkyne），這種化學(xué)修飾可用于對新生蛋白質(zhì)進(jìn)行高效標(biāo)記與檢測，因此OP-Puro是研究蛋白質(zhì)合成的重要工具。O-Propargyl-Puromyci的作用機(jī)理基于嘌呤霉素的經(jīng)典特性：作為氨基核苷酸抗生素，嘌呤霉素或者O-Propargyl-Puromyci可被核糖體識別并共價插入延伸中的多肽鏈C端，導(dǎo)致翻譯提前終止[1]。但與嘌呤霉素有所不同，O-Propargyl-Puromycin（CAS No.：1416561-90-4）的炔基可通過點(diǎn)擊化學(xué)（click chemistry）與疊氮化物修飾的熒光團(tuán)（如Alexa Fluor-azide）或生物素（biotin-azide）特異性結(jié)合，實(shí)現(xiàn)新生蛋白質(zhì)的可視化研究或者量化分析[2]。

O-Propargyl-Puromycin能在活細(xì)胞（如小鼠睪丸生精細(xì)胞[3]、大鼠胰島細(xì)胞[3]）或復(fù)雜模型（如類器官PDOs[2]、非洲爪蟾脊髓神經(jīng)元[4]）中動態(tài)監(jiān)測翻譯活動，無需依賴放射性標(biāo)記或遺傳改造[5]。在科研應(yīng)用中，O-Propargyl-Puromycin標(biāo)記后的檢測策略可分為以下兩種：通過顯微鏡觀察OPP-熒光團(tuán)偶聯(lián)物，揭示蛋白質(zhì)合成的亞細(xì)胞分布。例如，研究發(fā)現(xiàn)非洲爪蟾神經(jīng)元中，突觸誘導(dǎo)蛋白Agrin通過mTOR/4E-BP1通路局部激活翻譯，而O-Propargyl-Puromycin信號在突觸接觸位點(diǎn)顯著富集，證實(shí)了這一發(fā)現(xiàn)[4]；第二種檢測方法是利用組學(xué)技術(shù)進(jìn)行量化分析。

在原理上，O-Propargyl-Puromycin（OPP，OP-Puro，AbMole，M14749）可實(shí)現(xiàn)全蛋白質(zhì)組水平的新生肽段定量。例如，研究者通過鏈霉親和素珠捕獲生物素化OPP-多肽，隨后用于分析小鼠胚胎植入前發(fā)育過程中蛋白質(zhì)合成的全局變化[6]。AbMole為全球科研客戶提供高純度、高生物活性的抑制劑、細(xì)胞因子、人源單抗、天然產(chǎn)物、熒光染料、多肽、靶點(diǎn)蛋白、化合物庫、抗生素等科研試劑，全球大量文獻(xiàn)專利引用。
 
*本文所述產(chǎn)品僅供科研使用

參考文獻(xiàn)及鳴謝
[1] Villalobos-Cantor, S.; Barrett, R. M.; Condon, A. F.; et al. Rapid cell type-specific nascent proteome labeling in Drosophila. eLife 2023, 12.
[2] Morral, C.; Stanisavljevic, J.; Batlle, E. Protocol for Efficient Protein Synthesis Detection by Click Chemistry in Colorectal Cancer Patient-Derived Organoids Grown In Vitro. STAR protocols 2020, 1 (2), 100103.
[3] Zou, D.; Li, K.; Lu, Y.; et al. Protocol for identifying protein synthesis activity in specific cell types of the testicular lumen. STAR protocols 2025, 6 (1), 103661.
[4] Yu, J.; Oentaryo, M. J.; Lee, C. W. Local protein synthesis of neuronal MT1-MMP for agrin-induced presynaptic development. Development (Cambridge, England) 2021, 148 (10).
[5] Hidalgo San Jose, L.; Signer, R. A. J. Cell-type-specific quantification of protein synthesis in vivo. Nature protocols 2019, 14 (2), 441-460.
[6] Li, Y.; Ji, X.; Chang, L.; et al. Click-iT ((R)) Plus OPP Alexa Fluor ((R)) Protein Synthesis Assay in Embryonic Cells. Bio-protocol 2022, 12 (11), e4441.