六種蛋白檢測方法的原理、特點及適用樣本類型等介紹

為什么必須“多因子”？
😔傳統(tǒng) ELISA：1 孔 1 指標(biāo)，耗樣 50–100 µL，96孔板做10個指標(biāo) → 樣本直接見底！
😃多因子檢測：1 孔 10–96 指標(biāo)，耗樣 ≤50 µL，數(shù)據(jù)兩小時內(nèi)到手，縱向隊列研究“真香”！
蛋白檢測方法怎么選？6大平臺一次看懂，省錢、省時、省樣本！

一、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)
ELISA是基礎(chǔ)研究和臨床中對單一分析物進(jìn)行定量分析的重要技術(shù)。目前商用的細(xì)胞因子Elisa試劑盒大多采用雙抗體夾心法，能夠高特異性檢測復(fù)雜樣品中的分析物，可廣泛用于多個物種和靶標(biāo)。

特點：
（1）特異性高、靈敏度高、操作簡單方便、酶標(biāo)儀、成本相對較低。
（2）一次實驗僅能檢測一個靶標(biāo)，若需在同一樣品中檢測多個靶標(biāo)。
（3）操作多個Elisa較為復(fù)雜，時間花費長，且需要的樣本量較大，后面提到的多指標(biāo)分析技術(shù)可克服這些問題。

檢測儀器平臺：酶標(biāo)儀
反應(yīng)容器：96或384孔板
可檢測種屬：人、小鼠、大鼠、非人靈長類、豬、狗、牛、羊等多個種屬
可檢測樣本類型：血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清等，不同的試劑盒適配的樣本類型不同。
所需樣本體積：50-100 µL
單次實驗可檢測指標(biāo)數(shù)：1
靈敏度：pg/ml
線性范圍：2-3 logs，常規(guī)ELISA線性范圍在10pg/ml-1000pg/ml，超敏試劑盒則為0.5-10pg/ml，不同試劑盒線性范圍不同。

二、Luminex（液相懸浮芯片）
原理：
通過使用兩種不同的染料不同比例，產(chǎn)生多達(dá)100種不同顏色的微球。每種顏色的微球都具有獨特的編碼，并且只固定包被一種抗體，實現(xiàn)了編碼與靶標(biāo)的一一對應(yīng)。將多種不同編碼的微球混合在一起，放入同一個孔中。加入樣本和檢測抗體后，即可在一個樣本中同時檢測多種蛋白質(zhì)，從而實現(xiàn)高通量檢測。

特點：
（1）節(jié)省樣本體積，不管檢測指標(biāo)數(shù)量有多少，每例樣本都僅需50 uL。
（2）指標(biāo)‌高通量‌，單次檢測可實現(xiàn)‌96個指標(biāo)的檢測‌‌。
（3）靈敏度高‌，數(shù)據(jù)重復(fù)性高‌。
（4）指標(biāo)靈活組合‌，個性化定制，支持炎癥因子、趨化因子、血管類多類型指標(biāo)定制。滿足篩選驗證應(yīng)用多領(lǐng)域研究‌。

樣本種屬：人、小鼠、大鼠、非人靈長類、犬、豬、馬、牛、雞、羊、貓
可檢測樣本類型：細(xì)胞上清、血清、血漿、乳汁、尿液、組織裂解液、唾液、房水、腦脊液、支氣管肺泡灌洗液等多種樣本
所需樣本體積：25-50μL
靈敏度：pg/ml
線性范圍：3.5- 5.5 logs

三、MSD（超敏電化學(xué)發(fā)光技術(shù)）
原理
96孔板底部集成碳素電極，加入樣本后，目標(biāo)蛋白被捕獲，使用Sulfo-tagTM標(biāo)記物，形成“電極抗體抗原抗體SULFOTAG”夾心。通電后，電化學(xué)作用激發(fā)Sulf-tagTM標(biāo)記物發(fā)出強(qiáng)光。由于其獨特的電化學(xué)發(fā)光原理，可將許多非特異信號予以排除，受樣本性質(zhì)的影響更小，對于各類生物學(xué)樣本的兼容度高。

特點：
（1）節(jié)省樣本，10-50ul以內(nèi)完成10指標(biāo)。
（2）高靈敏、寬線性，數(shù)據(jù)重復(fù)性高，極適合低豐度生物標(biāo)志物（如神經(jīng)絲蛋白、tau）。
（3）指標(biāo)靈活組合‌，可做開發(fā)型實驗。
（4）MSD已成為Aβ38、40、42等多因子檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，另有α-Synuclein、APP、NFL、NFH、Tau、VEGF-A、GFAP等在內(nèi)的多種神經(jīng)相關(guān)指標(biāo)的檢測產(chǎn)品。  

檢測種屬：人、小鼠、大鼠、非人靈長類
可檢測樣本類型：細(xì)胞上清、血清、血漿、乳汁、尿液、組織裂解液、唾液、房水、腦脊液、支氣管肺泡灌洗液等多種樣本
所需樣本體積：10-50μL
靈敏度：可達(dá)fg/ml
線性范圍：3–6 logs，線性范圍更寬

四、Antibody Array（抗體芯片/固相芯片）
原理
抗體芯片技術(shù)利用特異性抗體，將目標(biāo)蛋白從復(fù)雜的生物樣本中捕獲并固定在芯片上。通過洗脫非特異性結(jié)合的蛋白，對目標(biāo)蛋白特異性檢測。

特點：
（1）與傳統(tǒng)的Western Blot相比，抗體芯片效率更高：
（2）節(jié)省樣本，樣本量少，100ul可檢測幾十個指標(biāo)！
（3）適用范圍廣，20余種研究領(lǐng)域全覆蓋，科研從此不再受限！
（4）高靈敏度：靈敏度高達(dá)pg/ml，科研數(shù)據(jù)更精準(zhǔn)！

檢測種屬：人、小鼠、大鼠
可檢測樣本：細(xì)胞培養(yǎng)上清、細(xì)胞組織裂解液、血清、血漿等
樣本體積：定量芯片50-100ul
靈敏度：pg/ml

五、PCR Array（信號通路基因表達(dá)芯片）
原理：
96孔板每孔預(yù)置特定基因引物探針（SYBR或TaqMan）；加入cDNA后，qPCR儀同時擴(kuò)增90–380個基因，通過ΔΔCt法或標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得各基因相對/絕對表達(dá)量。

特點：
（1）轉(zhuǎn)錄水平“多因子”，與蛋白結(jié)果互補；
（2）通路聚焦（炎癥小體、腫瘤免疫、代謝酶）。
（3）不受蛋白分泌/降解動力學(xué)影響，適合機(jī)制上游研究。
（4）僅測mRNA，需驗證蛋白水平；RNA質(zhì)量決定成敗。

總RNA起始量10ng–2µg；
靈敏度可檢測單拷貝；
動態(tài)范圍6–7logs；CV<5%。 

六、CBA（Cytometric Bead Array，流式微球陣列）
原理：
與前述Luminex類似，CBA也是基于微珠的檢測方法。將微珠用不同熒光染料染色，每種特定熒光的微珠包被特定分析物的抗體。添加帶有熒光素標(biāo)記的檢測抗體后，通過檢測抗體的熒光強(qiáng)度來量化分析物，能同時讀取多達(dá)10多種不同分析物。

特點：
（1）實驗室已有流式即可上手，零硬件門檻。
（2）使用30–50µL樣本，動態(tài)范圍4logs，靈敏度10–20pg/mL；
（3）通量低于Luminex，Panel≤13；
（4）微球沉降快，需及時上機(jī)。

樂備實是國內(nèi)專注于提供高質(zhì)量蛋白檢測以及組學(xué)分析服務(wù)的實驗服務(wù)專家，自2018年成立以來，樂備實不斷尋求突破，公司的服務(wù)技術(shù)平臺已擴(kuò)展到單細(xì)胞測序、空間多組學(xué)、流式檢測、超敏電化學(xué)發(fā)光、Luminex多因子檢測、抗體芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、PLA蛋白互作、多色免疫組化、DSP空間多組學(xué)等30多個，建立起了一套涵蓋基因、蛋白、細(xì)胞以及組織水平實驗的完整檢測體系。