Ribo-seq—檢測正在翻譯的RNA信息 連接轉(zhuǎn)錄組學(xué)與蛋白質(zhì)組學(xué)的橋梁
技術(shù)原理
翻譯（Translation）是基因表達的關(guān)鍵步驟，是指信使RNA序列的過程。蛋白質(zhì)翻譯的調(diào)控是高度精準(zhǔn)、多層次、動態(tài)化的過程。
雖然轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)一定程度上能夠評估蛋白質(zhì)的表達水平，然而，越來越多的研究結(jié)果表明，mRNA的豐度和蛋白質(zhì)的豐度存在較大差異。這主要是由于在翻譯過程中存在復(fù)雜的調(diào)控機制。蛋白質(zhì)可以通過質(zhì)譜技術(shù)直接量化蛋白質(zhì)的豐度，但無法檢測出mRNA的翻譯效率和蛋白質(zhì)的合成速率。迫切需要一種創(chuàng)新性技術(shù)，洞悉翻譯調(diào)控過程，并架起轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的橋梁。因此，翻譯組學(xué)⸺核糖體印跡測序（Ribosomeprofiling,Ribo-seq）恰逢其時地應(yīng)運而生。
核糖體印跡測序（Ribosomeprofiling,Ribo-seq），能夠精細解析細胞內(nèi)的翻譯過程。Ribo-seq的技術(shù)核心是識別與核糖體結(jié)合的RNA，以及正在被翻譯的約30個核苷酸。對核糖體結(jié)合的RNA片段進行測序，能夠精確記錄核糖體在翻譯過程中的位置。將轉(zhuǎn)錄組與Ribo-seq數(shù)據(jù)聯(lián)合分析，可以計算量化蛋白質(zhì)的合成速率。通過Ribo-seq分析，能夠鑒定新型的uORF、microPeptide、發(fā)現(xiàn)新穎的翻譯調(diào)控機制以及能夠被翻譯的lncRNA。
應(yīng)用方向
Ribo-seq應(yīng)用于研究轉(zhuǎn)錄本的翻譯活性、鑒定翻譯起始位點、密碼子使用、ORF位置和mRNA的翻譯調(diào)控機制。
Ribo-seq技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用在動物、植物和微生物的研究中，用于揭示生長發(fā)育、形態(tài)建成、疾病發(fā)生、逆境脅迫響應(yīng)的調(diào)控機制�？傊�，Ribo-seq能從基因組水平檢測正在翻譯的mRNA序列信息，揭示核糖體在mRNA上的位置和翻譯活性，并幫助解析翻譯調(diào)控機制。
翻譯（Translation）是基因表達的關(guān)鍵步驟，是指信使RNA序列的過程。蛋白質(zhì)翻譯的調(diào)控是高度精準(zhǔn)、多層次、動態(tài)化的過程。
雖然轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)一定程度上能夠評估蛋白質(zhì)的表達水平，然而，越來越多的研究結(jié)果表明，mRNA的豐度和蛋白質(zhì)的豐度存在較大差異。這主要是由于在翻譯過程中存在復(fù)雜的調(diào)控機制。蛋白質(zhì)可以通過質(zhì)譜技術(shù)直接量化蛋白質(zhì)的豐度，但無法檢測出mRNA的翻譯效率和蛋白質(zhì)的合成速率。迫切需要一種創(chuàng)新性技術(shù)，洞悉翻譯調(diào)控過程，并架起轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的橋梁。因此，翻譯組學(xué)⸺核糖體印跡測序（Ribosomeprofiling,Ribo-seq）恰逢其時地應(yīng)運而生。
核糖體印跡測序（Ribosomeprofiling,Ribo-seq），能夠精細解析細胞內(nèi)的翻譯過程。Ribo-seq的技術(shù)核心是識別與核糖體結(jié)合的RNA，以及正在被翻譯的約30個核苷酸。對核糖體結(jié)合的RNA片段進行測序，能夠精確記錄核糖體在翻譯過程中的位置。將轉(zhuǎn)錄組與Ribo-seq數(shù)據(jù)聯(lián)合分析，可以計算量化蛋白質(zhì)的合成速率。通過Ribo-seq分析，能夠鑒定新型的uORF、microPeptide、發(fā)現(xiàn)新穎的翻譯調(diào)控機制以及能夠被翻譯的lncRNA。
應(yīng)用方向
Ribo-seq應(yīng)用于研究轉(zhuǎn)錄本的翻譯活性、鑒定翻譯起始位點、密碼子使用、ORF位置和mRNA的翻譯調(diào)控機制。
Ribo-seq技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用在動物、植物和微生物的研究中，用于揭示生長發(fā)育、形態(tài)建成、疾病發(fā)生、逆境脅迫響應(yīng)的調(diào)控機制�？傊�，Ribo-seq能從基因組水平檢測正在翻譯的mRNA序列信息，揭示核糖體在mRNA上的位置和翻譯活性，并幫助解析翻譯調(diào)控機制。
藍景科信優(yōu)勢
實驗周期快、質(zhì)量高、結(jié)果穩(wěn)定可靠
豐富的物種經(jīng)驗
已做物種
人 小鼠 大鼠 豬 家蠶 果蠅 三角帆蚌 擬南芥 小麥 水稻 玉米 煙草 毛白楊 胡楊 甘薯 油松 草莓 棉花 甲藻 灰葡萄孢菌 大腸桿菌等
分析內(nèi)容
標(biāo)準(zhǔn)生信分析
1.原始數(shù)據(jù)過濾與測序質(zhì)量評估
2.比對去除rRNA、tRNA、sRNA等
3.Reads長度分布統(tǒng)計與長度過濾
4.比對參考基因組
5.測序飽和度分析
6.ORF在基因組上的分布統(tǒng)計與分類
7.三堿基節(jié)律分析
8.翻譯基因統(tǒng)計與表達量分析
9.樣本關(guān)系分析
10.組間差異翻譯基因分析
11.差異翻譯基因的GO和KEGG功能富集分析
12.ORF的翻譯潛力分析
13.ORF的特征分析
Ribo-seq與RNA-seq的聯(lián)合分析
1.翻譯效率計算
2.Ribo-seq與RNA-seq的相關(guān)性分析
3.翻譯效率與轉(zhuǎn)錄水平的關(guān)聯(lián)分析
實驗周期快、質(zhì)量高、結(jié)果穩(wěn)定可靠
豐富的物種經(jīng)驗
已做物種
人 小鼠 大鼠 豬 家蠶 果蠅 三角帆蚌 擬南芥 小麥 水稻 玉米 煙草 毛白楊 胡楊 甘薯 油松 草莓 棉花 甲藻 灰葡萄孢菌 大腸桿菌等
分析內(nèi)容
標(biāo)準(zhǔn)生信分析
1.原始數(shù)據(jù)過濾與測序質(zhì)量評估
2.比對去除rRNA、tRNA、sRNA等
3.Reads長度分布統(tǒng)計與長度過濾
4.比對參考基因組
5.測序飽和度分析
6.ORF在基因組上的分布統(tǒng)計與分類
7.三堿基節(jié)律分析
8.翻譯基因統(tǒng)計與表達量分析
9.樣本關(guān)系分析
10.組間差異翻譯基因分析
11.差異翻譯基因的GO和KEGG功能富集分析
12.ORF的翻譯潛力分析
13.ORF的特征分析
Ribo-seq與RNA-seq的聯(lián)合分析
1.翻譯效率計算
2.Ribo-seq與RNA-seq的相關(guān)性分析
3.翻譯效率與轉(zhuǎn)錄水平的關(guān)聯(lián)分析
相關(guān)技術(shù)服務(wù)
多聚核糖體圖譜（Polysome profiling）
利用蔗糖密度梯度離心分離游離mRNA、40S和60S核糖體亞基、單核糖體和多聚核糖體，收集多聚核糖體組分進行RNA或蛋白質(zhì)分析，從而直觀地呈現(xiàn)細胞內(nèi)mRNA的翻譯狀態(tài)。
多聚核糖體表達譜分析（Polysome-seq）
通過蔗糖密度梯度離心分離多聚核糖體組分，結(jié)合高通量測序技術(shù)，鑒定全基因組范圍內(nèi)編碼與非編碼基因、分析轉(zhuǎn)錄本翻譯效率、挖掘新的非編碼RNA翻譯功能，助力從mRNA到蛋白質(zhì)之間的翻譯調(diào)控機制研究。
甲基化RNA免疫沉淀測序（meRIP‒seq）
meRIP-seq通過將m6A抗體與帶有m6A修飾的RNA片段進行免疫共沉淀，結(jié)合高通量測序技術(shù)，在全轉(zhuǎn)錄組水平上鑒定和分析RNA的m6A甲基化修飾位點及修飾水平，從而揭示m6A修飾在基因表達調(diào)控等生物學(xué)過程中的作用機制。
RNA免疫共沉淀測序（RIP-seq）
通過RNA免疫沉淀技術(shù)富集與目標(biāo)蛋白結(jié)合的RNA，再進行高通量測序，在全轉(zhuǎn)錄組范圍內(nèi)分析體內(nèi)與特定蛋白相互作用的RNA分子，揭示RNA結(jié)合蛋白（RBP）與RNA互作，助力探索基因表達的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機制。
RNA親和純化測序（RAP-seq）
通過體外蛋白表達技術(shù)，表達出帶有標(biāo)簽的RNA結(jié)合蛋白（RBP），然后與RNA在體外進行孵育和結(jié)合，再分離出與目的RBP結(jié)合的RNA，結(jié)合高通量測序，可以鑒定出蛋白質(zhì)結(jié)合的mRNA、lncRNA等與細胞命運緊密相關(guān)的重要RNA。
多聚核糖體圖譜（Polysome profiling）
利用蔗糖密度梯度離心分離游離mRNA、40S和60S核糖體亞基、單核糖體和多聚核糖體，收集多聚核糖體組分進行RNA或蛋白質(zhì)分析，從而直觀地呈現(xiàn)細胞內(nèi)mRNA的翻譯狀態(tài)。
多聚核糖體表達譜分析（Polysome-seq）
通過蔗糖密度梯度離心分離多聚核糖體組分，結(jié)合高通量測序技術(shù)，鑒定全基因組范圍內(nèi)編碼與非編碼基因、分析轉(zhuǎn)錄本翻譯效率、挖掘新的非編碼RNA翻譯功能，助力從mRNA到蛋白質(zhì)之間的翻譯調(diào)控機制研究。
甲基化RNA免疫沉淀測序（meRIP‒seq）
meRIP-seq通過將m6A抗體與帶有m6A修飾的RNA片段進行免疫共沉淀，結(jié)合高通量測序技術(shù)，在全轉(zhuǎn)錄組水平上鑒定和分析RNA的m6A甲基化修飾位點及修飾水平，從而揭示m6A修飾在基因表達調(diào)控等生物學(xué)過程中的作用機制。
RNA免疫共沉淀測序（RIP-seq）
通過RNA免疫沉淀技術(shù)富集與目標(biāo)蛋白結(jié)合的RNA，再進行高通量測序，在全轉(zhuǎn)錄組范圍內(nèi)分析體內(nèi)與特定蛋白相互作用的RNA分子，揭示RNA結(jié)合蛋白（RBP）與RNA互作，助力探索基因表達的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機制。
RNA親和純化測序（RAP-seq）
通過體外蛋白表達技術(shù)，表達出帶有標(biāo)簽的RNA結(jié)合蛋白（RBP），然后與RNA在體外進行孵育和結(jié)合，再分離出與目的RBP結(jié)合的RNA，結(jié)合高通量測序，可以鑒定出蛋白質(zhì)結(jié)合的mRNA、lncRNA等與細胞命運緊密相關(guān)的重要RNA。
標(biāo)簽：
Ribo-seq
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