MASH治療熱門靶點(diǎn)THR-β、GLP-1、FGF21等的機(jī)制及相關(guān)檢測(cè)方法

代謝功能障礙相關(guān)脂肪性肝炎（MASH）是一種與代謝紊亂相關(guān)的慢性肝臟疾病，其特征是肝臟中脂肪的異常積累，伴隨著炎癥和肝細(xì)胞損傷。

2024年3月，生物醫(yī)藥公司Madrigal Pharmaceuticals研發(fā)的藥物Resmetirom（瑞美替羅）獲FDA批準(zhǔn)，用于治療MASH成人患者，這是全球首款獲批上市的MASH藥物。Resmetirom是一種靶向肝臟的甲狀腺激素受體 β（THR-β）口服選擇性激動(dòng)劑。在MASH中，肝臟中的甲狀腺激素β活性受損，導(dǎo)致線粒體功能降低和脂肪酸的β氧化，進(jìn)而導(dǎo)致炎癥和肝纖維化，Resmetirom旨在靶向這一基礎(chǔ)病因。

今年8月，諾和諾德（Novo Nordisk）的重磅療法Wegovy（2.4mg司美格魯肽）也獲得FDA的加速批準(zhǔn)，成為首個(gè)獲批用于治療MASH的胰高血糖素樣肽-1（GLP-1）療法。

一、MASH治療熱門靶點(diǎn)

1. 代謝相關(guān)靶點(diǎn)
改善MASH患者的代謝異常，主要包括改善胰島素敏感性、減輕脂質(zhì)積累、促進(jìn)脂肪酸的氧化和消耗過程等，涉及的靶點(diǎn)有THR-β、過氧化物酶體增殖物激活受體（PPARα）、轉(zhuǎn)錄因子(FoxO1)、磷脂酰肌醇激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）等。

（1）THR-β（甲狀腺激素受體β亞型）
機(jī)制：選擇性激活肝臟THR-β，上調(diào)脂肪酸氧化和膽固醇代謝，兼具抗炎、抗纖維化作用。2024年3月Madrigal的Resmetirom（Rezdiffra）獲FDA加速批準(zhǔn)，成為首個(gè)上市的MASH專用藥物，奠定THR-β一線地位。
國內(nèi)跟進(jìn)：歌禮、正大天晴、東陽光、基石等 10 余款 THR-β 激動(dòng)劑處于I–II期（代號(hào) ASC41、TQA2224、HEC-88473、CS0159 等）。

（2）泛/選擇性PPAR激動(dòng)劑
機(jī)制：同時(shí)激活α/δ/γ三種亞型，綜合調(diào)控脂質(zhì)氧化、糖代謝及炎癥。
進(jìn)展：Lanifibranor（Inventiva）IIb期1200mg組49% MASH緩解且纖維化不惡化，III期NATiV3正在入組。
Saroglitazar（印度 Zydus）已在南亞上市治療NAFLD，國際III期推進(jìn)中。
國內(nèi)：歌禮ASC43F（FXR/PPAR雙靶）I期完成；微芯生物西格列他鈉NAFLD II 期探索。

2. 抗炎類靶點(diǎn)
MASH治療需要抑制炎癥細(xì)胞募集、阻斷炎性信號(hào)傳導(dǎo)、降低氧化作用和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)、防止肝細(xì)胞凋亡等，涉及的抗炎類靶點(diǎn)有P53、胱天蛋白酶（caspase）、核苷酸結(jié)合寡聚結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3（NLRP3）、炎性因子（IL-6、IL-1β、TNF-α）等。

（1）FGF21類似物/融合蛋白
機(jī)制：內(nèi)分泌型成纖維細(xì)胞生長因子，可抑制肝星狀細(xì)胞活化、促進(jìn)脂肪酸氧化，兼具調(diào)脂、抗炎、抗纖維化。
進(jìn)展：Efruxifermin（Akero）IIb期28mg QW組76%患者纖維化改善≥1期且 MASH無惡化；III期SYNCHRONY啟動(dòng)。
Pegozafermin（89bio）IIb期30mg Q2W組37%達(dá)到雙主要終點(diǎn)；III期已開，2026年有望申報(bào)。
Efimosfermin alfa（BOS-580）GSK 20億美元并購，每月一次皮下，III期進(jìn)行中。
國內(nèi)：東陽光HEC-88473（FGF21融合蛋白）已獲NMPA II期批件；信立泰、復(fù)宏漢霖等早期分子在研。

（2）FXR激動(dòng)劑
機(jī)制：抑制膽汁酸合成、減少肝脂肪輸入并抗炎。
代表品種：奧貝膽酸（OCA）III 期雖達(dá)_histology_終點(diǎn)，但LDL升高與瘙癢導(dǎo)致FDA 只給“完全回應(yīng)函”；后續(xù) cilofexor（GS-9674）、tropifexor仍在 II/III 期，但熱度下降。

3. 消化類靶點(diǎn)
MASH治療涉及調(diào)控肝腸軸的循環(huán)、改善膽汁酸的循環(huán)與信號(hào)傳導(dǎo)、改善腸道菌群的平衡等，靶點(diǎn)有法尼醇X受體（FXR）、胰升血糖素樣肽1（GLP-1）等。在肝臟，GLP-1誘導(dǎo)胰島素從胰腺到肝臟，肝臟胰島素受體活性增加，從而抑制肝臟葡萄糖產(chǎn)生、增加肝臟葡萄糖攝取，減少脂肪的合成。此外，GLP-1R激活可降低極低密度脂蛋白（VLDL）的循環(huán)水平，VLDL將脂質(zhì)從肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)到肝外組織。

（1）GLP-1/多受體激動(dòng)劑
機(jī)制：通過中樞-外周協(xié)同降低體重、改善胰島素抵抗，減少肝臟脂肪輸入與從頭合成。
進(jìn)展：司美格魯肽已于2025年8月獲FDA批準(zhǔn)用于非硬化MASH；III 期 SYNERGY-NASH預(yù)計(jì)2026年完成。
替爾泊肽（GIP/GLP-1） II 期 52% 患者實(shí)現(xiàn) MASH 緩解且纖維化未惡化，III 期已啟動(dòng)。Survodutide（GCGR/GLP-1 雙靶）II期顯示83%緩解率，被勃林格殷格翰列為重點(diǎn)。
國內(nèi)：信達(dá) IBI-362（GLP-1/GCG 雙靶）II 期達(dá)到主要終點(diǎn)，華東、恒瑞、博瑞等多條 GLP-1 單/雙靶管線跟進(jìn)。

4. 抗纖維化靶點(diǎn)
抗纖維化包括抑制肝星狀細(xì)胞（HSCs）的活化、減輕肝細(xì)胞死亡、增強(qiáng)纖維分解等，靶點(diǎn)有Hippo信號(hào)通路、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）、I 型膠原蛋白 α1（COL1A1），B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2基因（Bcl-2）和細(xì)胞凋亡調(diào)控因子（Bax）等。

二、MASH研究相關(guān)檢測(cè)方法
1. 靶點(diǎn)蛋白
FGF21與Klotho β Protein
在使用NIH-3T3小鼠胚胎成纖維細(xì)胞進(jìn)行的細(xì)胞增殖測(cè)定中測(cè)量。使用1.5 μg/ml重組Human Klotho β，檢測(cè)EC50＜1μg/ml

圖： FGF21與Klotho β檢測(cè)數(shù)據(jù)

以Human IL-1β 蛋白為例（UA040151）

圖左：使用D10.G4.1小鼠輔助性T細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞增殖試驗(yàn)，檢測(cè)Human IL-1β 蛋白活性。該效應(yīng)的EC50小于10pg/ml。圖右：1μg Human IL-1β 蛋白（R：還原狀態(tài)，N：非還原狀態(tài)）

圖：Human IL-1β 蛋白（18kDa）檢測(cè)數(shù)據(jù)

2、細(xì)胞因子&生物標(biāo)志檢測(cè)
炎性因子（IL-6、IL-1β、TNF-α）、纖維化標(biāo)志物（COL1A1、α-SMA）是研究MASH治療靶點(diǎn)的下游細(xì)胞因子，可作為評(píng)估藥物對(duì)MASH患者影響的可靠生物標(biāo)志物 ​​。使用均相免洗免疫檢測(cè)技術(shù)TR-FRET或ELISA，可以在大分子數(shù)據(jù)庫中快速篩選潛在候選分子。

（1）THUNDER TR-FRET方法
Human IL-6 為例
THUNDER細(xì)胞因子檢測(cè)是基于雙抗體夾心法，標(biāo)記熒光供體和受體的TNF-α抗體Eu-Ab1和FR-Ab2，分別與細(xì)胞上清中IL-6結(jié)合，產(chǎn)生能量共振轉(zhuǎn)移FRET（615nm），進(jìn)而產(chǎn)生665nm熒光信號(hào)，熒光信號(hào)強(qiáng)度與IL-6濃度成正比。全程僅需1h，免洗，可高通量。檢測(cè)靈敏度高，上限寬。

Human IL-6檢測(cè)范圍：64 – 30,000 pg/mL

圖：Human IL-6檢測(cè)原理，流程及標(biāo)曲

Human IL-1β 檢測(cè)范圍：26 – 10,000 pg/mL

圖：Human IL-1β檢測(cè)原理，流程及標(biāo)曲

（2）OneStep ELISA細(xì)胞因子檢測(cè)
OneStep ELISA開發(fā)標(biāo)簽抗體捕獲技術(shù)，板底包被標(biāo)簽抗體，可高靈敏捕獲雙抗夾心復(fù)合物，搭配高特異性重組單抗，一步即可在溶液中形成抗體-分析物夾心復(fù)合物。可輕松準(zhǔn)確定量蛋白。僅需1h，即可定量細(xì)胞因子。Human IL-6，檢測(cè)范圍：2.1 pg/ml - 136 pg/ml。

圖左：OneStep ELISA 檢測(cè)原理及流程。圖右：Human IL-6標(biāo)準(zhǔn)曲線

3、信號(hào)通路磷酸化蛋白檢測(cè)
p-AKT、p-p53是研究MASH治療的下游磷酸化蛋白。使用均相免洗免疫檢測(cè)技術(shù)TR-FRET，可以在大分子數(shù)據(jù)庫中快速篩選潛在候選分子。使用WB，可以初步檢測(cè)蛋白變化。

（1）THUNDER TR-FRET 磷酸化蛋白檢測(cè)
THUNDER TR-FRET時(shí)間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移，檢測(cè)技術(shù)靈敏度高，特異性好，重復(fù)性好，操作簡單，僅需4h。一種基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET，F(xiàn)luorescence Resonance Energy Transfer）和時(shí)間分辨熒光（TRF, Time-Resolved Fluorescence）的技術(shù)，采用夾心法，檢測(cè)胞內(nèi)AKT磷酸化水平和總AKT水平。

Phospho-AKT pan (S473) 為例

圖左：THUNDER磷酸化蛋白檢測(cè)原理示意圖。圖右：Phospho-AKT pan (S473)檢測(cè)試劑盒流程。

圖. THUNDER Phospho-AKT (S473)驗(yàn)證數(shù)據(jù)

（2）WB方法檢測(cè)
以Phospho-Akt (Ser473)為例
Phospho-Akt (Ser473) Rabbit mAb 抗體采用1/1000稀釋， HELA細(xì)胞饑餓處理過夜，100 ng/ml Calyculin A處理30分鐘， Goat Anti-rabbit IgG, (H+L), HRP 采用1/10000稀釋，上樣檢測(cè)，數(shù)據(jù)展示如下。

圖：Hela細(xì)胞WB檢測(cè)p-AKT數(shù)據(jù)展示（Lane 1: HeLa whole cell lysate 20 µg，Lane 2: HeLa starve overnight, then treated with calyculin A (100 nM, 30 min) whole cell lysate 20 µg. Predicted MW: 56 kDa）

相關(guān)產(chǎn)品推薦

蛋白
產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格
Human IL-1β	UA040151	100ug
FGF21	UA040001	100ug
FGF19	UA040086	100ug
Klotho β Protein, Human	UA040050	100ug
Biotinylated p85/p110 (H1047R)	UA080390	100ug
Biotinylated p85/p110(E545K) Protein	UA080392	100ug
Biotinylated PIK3CA/PIK3R1 (WT) Protein	UA080391	100ug
p110δ/p85α Protein	UA080450	100ug
細(xì)胞因子&生物標(biāo)志檢測(cè)
產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格
Human IL-6 TR-FRET Assay	KIT-IL6-500	500 points
Human TNFα TR-FRET Assay	KIT-TNFA-500	500 points
Human COL1A1 TR-FRET Assay	KIT-COL1A1-500	500 points
Human IL-1β TR-FRET Assay	KIT-IL1B-500	500 points
Human IL-1β OneStep ELISA	S0C3013	96T
Human IL-6 OneStep ELISA	S0C3004	96T
Human TNF-α OneStep ELISA	S0C3024	96T
S-RMab® alpha smooth muscle Actin (SMA) Recombinant Rabbit mAb	S0B2163-100μl	100μl
信號(hào)通路磷酸化蛋白檢測(cè)
產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格
Phospho-AKT pan (S473) TR-FRET Assay	KIT-AKTS473P-100	500 points
Phospho-p53 (S15) TR-FRET Assay	KIT-P53P-500	500 points
Phospho-SMAD3 (S423/S425) TR-FRET Assay	KIT-SMAD3P-500	500 points
Phospho-SMAD2 (S465/S467) TR-FRET Assay	KIT-SMAD2P-500	500 points
Phospho-NF-kB (S536) TR-FRET Assay	KIT-NFKBP-500	500 points
Phospho-Akt (Ser473) Recombinant Rabbit mAb (S-510-64)	S0B0363-25μl	25μl

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