AdCAR-T不靶向CD276的情況下避免CAR-T自相殘殺的機(jī)制研究

文章來(lái)源于公眾號(hào)：of studies             作者：of studies

我們所熟知的CART細(xì)胞自相殘殺大多發(fā)生在CD7、CD38這種血液腫瘤相關(guān)靶點(diǎn)中，今天看到JHO新發(fā)的一篇文章是關(guān)于避免CD276 CART自相殘殺的，很有趣。

CD276在小細(xì)胞肺癌SCLC等實(shí)體瘤中高表達(dá)，這項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞激活及CAR信號(hào)會(huì)誘導(dǎo)CAR-T細(xì)胞自身也表達(dá)CD276，導(dǎo)致自相殘殺（fratricide），從而限制抗CD276 CAR-T細(xì)胞的擴(kuò)增與活性。

所以他們提出了一種避免自相殘殺的策略，可以一起看下。

1、CD276是小細(xì)胞肺癌理想靶點(diǎn)

• 79 例原發(fā)瘤 RNA-seq：CD276 表達(dá)顯著高于 DLL3。
• 四種分子亞型（SCLC-A/N/P/Y）細(xì)胞系均高表達(dá) CD276，而 DLL3 表達(dá)不均。
• 流式證實(shí) 4 株 SCLC 細(xì)胞系表面 CD276 高陽(yáng)性。
• 組織芯片（TMA，39 例）IHC：71.8% 樣本高表達(dá) CD276（H-score 量化）。

體外擴(kuò)增Ad CART培養(yǎng)時(shí)不添加AM，無(wú)靶抗原刺激，避免 CAR-T 被激活或耗竭，也消除自相殘殺風(fēng)險(xiǎn)�？色@得更高產(chǎn)量、更“年輕”的記憶表型（TCM/TSCM）細(xì)胞產(chǎn)品。

體內(nèi)給藥時(shí)引入 AM，注射 AM 后形成“AdCAR-T + AM”復(fù)合物，連接腫瘤細(xì)胞并觸發(fā)殺傷。

Fab適配分子AM 停藥后，快速清除，AdCAR-T 進(jìn)入“休息”期，減少持續(xù)信號(hào)導(dǎo)致的耗竭。

可調(diào)給藥方案（間歇/持續(xù)），根據(jù)腫瘤負(fù)荷設(shè)計(jì)每日、隔日或“4-天給藥/3-天停藥”等方案，平衡療效與T細(xì)胞持久性。實(shí)現(xiàn)“遠(yuǎn)程遙控”式的開關(guān)控制，提高安全性。

另外這個(gè)方案還有多靶點(diǎn)與序貫切換能力，通過(guò)更換 AM（不同 Fab）即可快速切換靶抗原，無(wú)需重新制備 CAR-T。為抗原異質(zhì)性或復(fù)發(fā)后抗原逃逸提供“現(xiàn)成”解決方案。這個(gè)策略也是可以應(yīng)用到血液瘤的CD7的

dCAR-T（直接抗 CD276）體外擴(kuò)增 6 天細(xì)胞數(shù)顯著低于 AdCAR-T 或未轉(zhuǎn)導(dǎo) T 細(xì)胞。

激活的 AdCAR-T 中 15–20% 表達(dá) CD276，主要見于 CD4+亞群。

重復(fù)刺激實(shí)驗(yàn)顯示，CAR 信號(hào)本身可再次上調(diào) CD276。

用 CD276 Fab 或全長(zhǎng) mAb 處理 AdCAR-T后，死細(xì)胞↑、激活標(biāo)志↑，證實(shí)自相殘殺機(jī)制。

3、新型 Fab-AM 的篩選與體外功能

人源 scFv 噬菌體庫(kù) → 親和力成熟 → 5 個(gè)先導(dǎo) Fab-AM（AM14/19/24/34/46）。

EC50 27–41 pM；AM46 殺傷 SHP-77 最優(yōu)且可持續(xù) 3 輪再挑戰(zhàn)（192 h）。

對(duì) RH30、IMR-32、DMS114 等多系同樣有效；細(xì)胞因子分泌無(wú)異常升高。

獲得了高親和力、可量產(chǎn)、功能強(qiáng)的 AM46，用于后續(xù)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。

4、AdCAR-T + AM46 體內(nèi)控制 SCLC 進(jìn)展

NSG 小鼠尾靜脈 SHP-77-luc 模型中，dCAR-T 初期減瘤但迅速?gòu)?fù)發(fā)；

AdCAR-T 僅在有 AM46 時(shí)顯著抑制腫瘤并延長(zhǎng)生存。

AM46 存在時(shí) AdCAR-T 早期擴(kuò)增，停藥后仍能被再次激活并清除二次攻擊瘤。

5、優(yōu)化給藥方案

6、IL-18 裝甲增強(qiáng) AdCAR-T 功能


IL-18 裝甲通過(guò)增強(qiáng) CD4⁺ 存活與記憶分化，進(jìn)一步提升 AdCAR-T 的持久與再擴(kuò)能力。

小結(jié)
AdCAR-T平臺(tái)可在不靶向CD276的情況下實(shí)現(xiàn)T細(xì)胞擴(kuò)增，新型CD276靶向AM在體外和體內(nèi)均顯示出對(duì)SCLC的強(qiáng)效殺傷作用。與傳統(tǒng)CD276-CAR-T相比，間歇性AM給藥可使AdCAR-T在體內(nèi)保持功能持久性。此外，通過(guò)在AdCAR-T中引入激活誘導(dǎo)、AM遠(yuǎn)程控制的IL-18分泌，可進(jìn)一步增強(qiáng)其體內(nèi)擴(kuò)增與抗腫瘤活性。