OI 600應(yīng)用實(shí)例：ACSS2—Hepcidin 通路抑制酒精性肝損傷中的鐵死亡

近期發(fā)表于《Nature Communications》（IF=15.7，Q1/1區(qū)）的研究顯示：長(zhǎng)期乙醇暴露抑制乙酸輔酶A合成酶2(ACSS2)，阻斷乙酸到乙酰輔酶A的生成；隨之CBP-依賴的組蛋白乙�；瘻p少，使肝臟鐵調(diào)素基因HAMP1/2(hepcidin)轉(zhuǎn)錄受抑。鐵調(diào)控失衡疊加脂質(zhì)過(guò)氧化，引發(fā)鐵死亡并加重酒精性肝損傷。補(bǔ)回ACSS2、過(guò)表達(dá)HAMP1/2，或給予Fer-1/DFO/重組hepcidin均能顯著改善表型。

疾病痛點(diǎn)：酒精性肝�。ˋlcoholic Liver Disease, ALD）發(fā)病上升、有效藥物缺位，移植幾乎是末期主要選擇——機(jī)制與可成藥靶點(diǎn)稀缺。

機(jī)制新意：把“代謝（ACSS2）-表觀（乙�；�）-鐵穩(wěn)態(tài)（hepcidin）—細(xì)胞死亡（ferroptosis）”串成閉環(huán)，為ALD的鐵負(fù)荷與肝損傷提供統(tǒng)一解釋。

人群/動(dòng)物/細(xì)胞多層驗(yàn)證：人群血清乙酸、hepcidin、鐵指標(biāo)；雌雄小鼠乙醇飼喂“急+慢”兩種模型；肝細(xì)胞體外乙醇暴露。

遺傳與藥理雙路徑：肝細(xì)胞特異Acss2敲除、AAV-Acss2回補(bǔ)；ACSS2抑制劑加重表型；AAV-Hamp1/2或hepcidin/Fer-1/DFO糾偏。

核心指標(biāo)：肝功能、生化脂質(zhì)、炎癥因子、鐵穩(wěn)態(tài)（HAMP1/2、FPN、TFRC、普魯士藍(lán)、組織/血清鐵）、鐵死亡（GSH、LPO、4-HNE、C11-BODIPY、ROS、線粒體超微結(jié)構(gòu)）。

部分方法學(xué)

Western blot（化學(xué)發(fā)光成像）

蛋白檢測(cè)方法：研究人員將樣本經(jīng)SDS-PAGE分離并轉(zhuǎn)印至0.45 μm NC膜，5%脫脂奶粉封閉后按標(biāo)準(zhǔn)流程完成一抗（4 °C 過(guò)夜）與二抗（室溫 90 min）孵育，隨后使用光儀（BIO-OI）OI600全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)采集ECL條帶圖像，用于后續(xù)定量分析。

相關(guān)發(fā)現(xiàn)

組蛋白乙�；�變化

檢測(cè)H3/H4及其位點(diǎn)乙�；�（H3K9ac、H3K14ac、H3K18ac、H3K27ac；H4K5ac、H4K8ac、H4K12ac）條帶，顯示ACSS2下降伴隨乙酰化降低。

ACSS2–CBP相互作用的Co-IP+WB

Flag-ACSS2/HA-CBP過(guò)表達(dá)體系與內(nèi)源體系的Co-IP后，以WB條帶確認(rèn)結(jié)合。

鐵穩(wěn)態(tài)/肝損傷相關(guān)蛋白的WB

論文對(duì)HAMP1/2（hepcidin）與FPN等鐵穩(wěn)態(tài)關(guān)鍵蛋白進(jìn)行了WB檢測(cè)，用于評(píng)估ACSS2過(guò)表達(dá)或干預(yù)（AAV-Acss2、AAV-Hamp1/2、重組hepcidin、Fer-1/DFO）對(duì)通路的糾偏作用；這些WB條帶均按同流程由OI600采集。

Fig 5b:AAV-Acss2 轉(zhuǎn)導(dǎo)效率	Fig 6a-b:組蛋白乙�；�位點(diǎn)（H3K9ac/H3K14ac/H3K18ac/H3K27acH4K5ac/H4K8ac/H4K12ac）Western blot。 Fig 6c–f：ACSS2 與 CBP 的 Co-IP + WB。

實(shí)驗(yàn)配套

這類課題的WB，如何用OI600做到“穩(wěn)、準(zhǔn)、快”

這類弱信號(hào)WB對(duì)成像設(shè)備提出了三點(diǎn)核心要求：靈敏度、線性區(qū)和多模式兼容，而OI 600能很好的滿足以上需求。

設(shè)備要點(diǎn)：

▶900萬(wàn)像素深冷科研相機(jī)，高靈敏、低噪聲，適合弱信號(hào)ECL/化學(xué)發(fā)光與微弱熒光；

▷F0.95大光圈自動(dòng)對(duì)焦鏡頭，弱信號(hào)條帶進(jìn)光量充足；

▶峰值QE可達(dá)約95%，在可見(jiàn)-近紅外波段都能高效收光，暗條帶信號(hào)也不流失；

▷可選配RGB熒光光源/紫外/白光/ECL樣品臺(tái)，覆蓋生物化學(xué)發(fā)光、凝膠成像、多色熒光、孔板發(fā)光等場(chǎng)景。

小結(jié)

本文以“ACSS2-乙�；�-HAMP1/2-鐵穩(wěn)態(tài)-鐵死亡”為主線，把ALD的代謝與細(xì)胞死亡機(jī)制打通，并在遺傳/藥理/人群多層檢驗(yàn)。針對(duì)這類課題的條帶與弱發(fā)光拍攝，OI600提供了“深冷相機(jī)+大光圈自動(dòng)對(duì)焦+高量子效率+OD6濾光+多光源樣品臺(tái)”的一體化方案，既能把弱信號(hào)拍清楚，也能把歸一化證據(jù)留完整，利于可復(fù)現(xiàn)與審稿。

參考文獻(xiàn)：Wang M, Wen X, et al. ACSS2 protects against alcohol-induced hepatocyte ferroptosis through regulation of hepcidin expression. Nature Communications (2025). doi:10.1038/s41467-025-61067-8