AC16人心肌細(xì)胞的培養(yǎng)復(fù)蘇和常見問題解答
【細(xì)胞介紹】
AC16是一種由成人心臟心室組織的原代細(xì)胞與經(jīng)SV40轉(zhuǎn)化的尿苷營(yíng)養(yǎng)缺陷型的人成纖維細(xì)胞（缺乏線粒體DNA）融合而來(lái)的雜交細(xì)胞系，顯示出心肌細(xì)胞的典型特征，包括轉(zhuǎn)錄因子如GATA4、MYCD、NFATc4的表達(dá)，以及收縮蛋白如α -和β -肌球蛋白重鏈。AC16細(xì)胞也表達(dá)間隙連接蛋白connexin-43和connexin-40，染料偶聯(lián)研究證實(shí)其具有功能性間隙連接，強(qiáng)調(diào)其在心肌細(xì)胞研究中的應(yīng)用。當(dāng)SV40癌基因被沉默時(shí)，AC16轉(zhuǎn)變?yōu)楦只臓顟B(tài)，以BMP2的表達(dá)為標(biāo)志，表明心臟分化和發(fā)育調(diào)節(jié)。
科學(xué)家們采用各種技術(shù)，包括干細(xì)胞分化、動(dòng)物模型、分子分析和生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)，來(lái)推進(jìn)心臟相關(guān)疾病的知識(shí)和潛在治療。有絲分裂原和衰老途徑的參與，以及胸苷激酶的誘導(dǎo)，進(jìn)一步闡明了人類心肌細(xì)胞的復(fù)雜性及其對(duì)病理?xiàng)l件的反應(yīng)。
AC16人心肌細(xì)胞系具有模仿成熟心肌細(xì)胞行為的能力，使其成為心臟研究的一個(gè)有價(jià)值的模型。它與原代心肌細(xì)胞的遺傳組成非常相似，允許在體外研究心臟發(fā)育、病理和組蛋白丟失的含義，然而，心肌細(xì)胞的行為和遺傳復(fù)雜性可能與原代或干細(xì)胞衍生的心肌細(xì)胞不完全匹配。在毒理學(xué)和心血管疾病研究的背景下，AC16細(xì)胞是了解心肌細(xì)胞發(fā)育、炎癥、損傷、再生和毒理學(xué)效應(yīng)的重要工具。
AC16人類心肌細(xì)胞細(xì)胞系的獨(dú)特特性，包括其對(duì)發(fā)育線索的反應(yīng)和模擬人類心肌細(xì)胞生理?xiàng)l件的能力，使其成為解開心臟病奧秘和設(shè)計(jì)新的治療干預(yù)措施的有用模型。
以下是中喬新舟拍攝的AC16細(xì)胞拍攝的在不同放大倍數(shù)下的圖片：
4X
10X
20X
細(xì)胞名稱：AC16人心肌細(xì)胞
細(xì)胞別稱：AC16；AC16 [Human hybrid cardiomyocyte]
產(chǎn)品貨號(hào)：ZQ0960
生長(zhǎng)特性：貼壁
培養(yǎng)條件 ：DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基（中喬新舟 貨號(hào)：ZQ-600）+10%胎牛血清 (品牌：中喬新舟 貨號(hào)：ZQ500-A）+1%P/S（品牌：中喬新舟 貨號(hào)：CSP006）
完全培養(yǎng)基貨號(hào)：ZM0960
【細(xì)胞傳代】
1.細(xì)胞有脫落情況時(shí)，將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管中，離心（125g，3～5分鐘）1000-1200rmp收集懸浮細(xì)胞（漂浮細(xì)胞少，可能無(wú)沉淀，大部分在管壁上）；輕柔去除培養(yǎng)基，等貼壁細(xì)胞消化收集在一起混勻接種。
2.貼壁細(xì)胞用PBS洗1~2次，每次3-5ml，添加1ml 胰酶（0.25% 含EDTA）到細(xì)胞瓶中，輕輕搖勻，使胰酶溶液鋪滿細(xì)胞表面，放入培養(yǎng)箱中。1-3min后取出到顯微鏡下觀察，(若細(xì)胞無(wú)變化繼續(xù)放入培養(yǎng)箱消化)一旦細(xì)胞變圓、輕拍瓶尾部大部分細(xì)胞開始脫落，當(dāng)達(dá)到70-80%細(xì)胞漂浮脫落，立即加入5ml完全培養(yǎng)基(含10%FBS)中和。用移液管輕輕吹打6-8次，使細(xì)胞充分解離。
3.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管中，計(jì)數(shù)，離心收集細(xì)胞。用適量完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，使細(xì)胞密度為每毫升0.6-2X105。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)至培養(yǎng)瓶中，靜置于培養(yǎng)箱中。建議T25培養(yǎng)瓶添加5-7ml完全培養(yǎng)基，以后2-3天進(jìn)行換液。
【細(xì)胞凍存】
1.細(xì)胞密度80%以上，活細(xì)胞百分率達(dá)95%以上時(shí)，將細(xì)胞按照以上步驟進(jìn)行消化收集細(xì)胞沉淀進(jìn)行凍存。
2.細(xì)胞沉淀用適量4°C凍存液（貨號(hào)：CSP042）重懸， 建議一瓶T25細(xì)胞凍存一管（1ml/管），直接將分裝好的細(xì)胞凍存管置于-80℃超低溫冰箱中過夜，若需液氮長(zhǎng)期保存，需先置于-80℃至少一天后方可轉(zhuǎn)至液氨罐中。
NOTE:若不是我司凍存液請(qǐng)按照凍存液說明書操作，若是自配凍存液需梯度降溫凍存(2-8℃，放置 40min:-20℃,放置 30min-60min，-80℃放置一天后轉(zhuǎn)移至液氮保存)或使用程序降溫盒降溫后，再轉(zhuǎn)移至液氮中保存。
【細(xì)胞復(fù)蘇】
1.液氮取出的細(xì)胞放入干冰中轉(zhuǎn)移到細(xì)胞房，提前準(zhǔn)備好完全培養(yǎng)基，離心管。
2.凍管細(xì)胞在37°C水浴中迅速解凍（大約1-2分鐘）。為了減少污染的可能性，保持凍管瓶蓋在水浴液面之上。 一旦大部分內(nèi)容物解凍，立即將凍管移出水浴，70%的乙醇消毒凍管外壁。
3.將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到含3-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中，輕輕混勻，離心（125 g，3～5分鐘）1000-1200rmp去除培養(yǎng)基， 細(xì)胞沉淀用手指彈松，添加3ml完全培養(yǎng)基混勻細(xì)胞并進(jìn)行計(jì)數(shù)，用適量完全培養(yǎng)基將細(xì)胞密度調(diào)整至0.6-2.0X105，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中，于培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。建議T25培養(yǎng)瓶添加5-7ml完全培養(yǎng)基。當(dāng)密度達(dá)到80%以上時(shí)傳代。
【常見問題】
1、何時(shí)須更換培養(yǎng)基
視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定，常規(guī)細(xì)胞2-3天更換培養(yǎng)基。
2、何時(shí)進(jìn)行傳代
細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)
首次傳代建議1：2傳代，就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。
3、可否使用與原先不同培養(yǎng)基
不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng)，易造成細(xì)胞狀態(tài)不好，最終造成細(xì)胞無(wú)法存活。
4、可否使用與原先不同血清種類
不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。
【發(fā)表過的文獻(xiàn)】
截至到2024年，引用中喬新舟該細(xì)胞發(fā)表過的文獻(xiàn)總數(shù)9篇，總的影響因子54.2，最高影響因子12.70，數(shù)據(jù)如下：
下面列舉了幾篇代表性的文獻(xiàn)，可以參考：
1.論文題目：TRIM21 promotes ubiquitination of SARS-CoV-2 nucleocapsid protein to regulate innate immunity.
期刊： JOURNAL OF MEDICAL VIROLOGY 影響因子：12.7
2.論文題目：PCSK6 attenuates cardiac dysfunction in doxorubicin-induced cardiotoxicity by regulating autophagy.
期刊： FREE RADICAL BIOLOGY AND MEDICINE 影響因子：7.4
3.論文題目：Altered Expression of Transfer-RNA-Derived Small RNAs in Human With Rheumatic Heart Disease.
期刊： Frontiers in Cardiovascular Medicine 影響因子：6.05
4.論文題目：GSK-J4, a Specific Histone Lysine Demethylase 6A Inhibitor, Ameliorates Lipotoxicity to Cardiomyocytes via Preserving H3K27 Methylation and Reducing Ferroptosis.
期刊： Frontiers in Cardiovascular Medicine 影響因子：5.846
5.論文題目：Knockdown of KLF6 ameliorates myocardial infarction by regulating autophagy via transcriptional regulation of PTTG1.
期刊： AMERICAN JOURNAL OF PHYSIOLOGY-CELL PHYSIOLOGY 影響因子：5.0
AC16是一種由成人心臟心室組織的原代細(xì)胞與經(jīng)SV40轉(zhuǎn)化的尿苷營(yíng)養(yǎng)缺陷型的人成纖維細(xì)胞（缺乏線粒體DNA）融合而來(lái)的雜交細(xì)胞系，顯示出心肌細(xì)胞的典型特征，包括轉(zhuǎn)錄因子如GATA4、MYCD、NFATc4的表達(dá)，以及收縮蛋白如α -和β -肌球蛋白重鏈。AC16細(xì)胞也表達(dá)間隙連接蛋白connexin-43和connexin-40，染料偶聯(lián)研究證實(shí)其具有功能性間隙連接，強(qiáng)調(diào)其在心肌細(xì)胞研究中的應(yīng)用。當(dāng)SV40癌基因被沉默時(shí)，AC16轉(zhuǎn)變?yōu)楦只臓顟B(tài)，以BMP2的表達(dá)為標(biāo)志，表明心臟分化和發(fā)育調(diào)節(jié)。
科學(xué)家們采用各種技術(shù)，包括干細(xì)胞分化、動(dòng)物模型、分子分析和生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)，來(lái)推進(jìn)心臟相關(guān)疾病的知識(shí)和潛在治療。有絲分裂原和衰老途徑的參與，以及胸苷激酶的誘導(dǎo)，進(jìn)一步闡明了人類心肌細(xì)胞的復(fù)雜性及其對(duì)病理?xiàng)l件的反應(yīng)。
AC16人心肌細(xì)胞系具有模仿成熟心肌細(xì)胞行為的能力，使其成為心臟研究的一個(gè)有價(jià)值的模型。它與原代心肌細(xì)胞的遺傳組成非常相似，允許在體外研究心臟發(fā)育、病理和組蛋白丟失的含義，然而，心肌細(xì)胞的行為和遺傳復(fù)雜性可能與原代或干細(xì)胞衍生的心肌細(xì)胞不完全匹配。在毒理學(xué)和心血管疾病研究的背景下，AC16細(xì)胞是了解心肌細(xì)胞發(fā)育、炎癥、損傷、再生和毒理學(xué)效應(yīng)的重要工具。
AC16人類心肌細(xì)胞細(xì)胞系的獨(dú)特特性，包括其對(duì)發(fā)育線索的反應(yīng)和模擬人類心肌細(xì)胞生理?xiàng)l件的能力，使其成為解開心臟病奧秘和設(shè)計(jì)新的治療干預(yù)措施的有用模型。
以下是中喬新舟拍攝的AC16細(xì)胞拍攝的在不同放大倍數(shù)下的圖片：
4X
10X
20X
細(xì)胞名稱：AC16人心肌細(xì)胞
細(xì)胞別稱：AC16；AC16 [Human hybrid cardiomyocyte]
產(chǎn)品貨號(hào)：ZQ0960
生長(zhǎng)特性：貼壁
培養(yǎng)條件 ：DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基（中喬新舟 貨號(hào)：ZQ-600）+10%胎牛血清 (品牌：中喬新舟 貨號(hào)：ZQ500-A）+1%P/S（品牌：中喬新舟 貨號(hào)：CSP006）
完全培養(yǎng)基貨號(hào)：ZM0960
【細(xì)胞傳代】
1.細(xì)胞有脫落情況時(shí)，將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管中，離心（125g，3～5分鐘）1000-1200rmp收集懸浮細(xì)胞（漂浮細(xì)胞少，可能無(wú)沉淀，大部分在管壁上）；輕柔去除培養(yǎng)基，等貼壁細(xì)胞消化收集在一起混勻接種。
2.貼壁細(xì)胞用PBS洗1~2次，每次3-5ml，添加1ml 胰酶（0.25% 含EDTA）到細(xì)胞瓶中，輕輕搖勻，使胰酶溶液鋪滿細(xì)胞表面，放入培養(yǎng)箱中。1-3min后取出到顯微鏡下觀察，(若細(xì)胞無(wú)變化繼續(xù)放入培養(yǎng)箱消化)一旦細(xì)胞變圓、輕拍瓶尾部大部分細(xì)胞開始脫落，當(dāng)達(dá)到70-80%細(xì)胞漂浮脫落，立即加入5ml完全培養(yǎng)基(含10%FBS)中和。用移液管輕輕吹打6-8次，使細(xì)胞充分解離。
3.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管中，計(jì)數(shù)，離心收集細(xì)胞。用適量完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，使細(xì)胞密度為每毫升0.6-2X105。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)至培養(yǎng)瓶中，靜置于培養(yǎng)箱中。建議T25培養(yǎng)瓶添加5-7ml完全培養(yǎng)基，以后2-3天進(jìn)行換液。
【細(xì)胞凍存】
1.細(xì)胞密度80%以上，活細(xì)胞百分率達(dá)95%以上時(shí)，將細(xì)胞按照以上步驟進(jìn)行消化收集細(xì)胞沉淀進(jìn)行凍存。
2.細(xì)胞沉淀用適量4°C凍存液（貨號(hào)：CSP042）重懸， 建議一瓶T25細(xì)胞凍存一管（1ml/管），直接將分裝好的細(xì)胞凍存管置于-80℃超低溫冰箱中過夜，若需液氮長(zhǎng)期保存，需先置于-80℃至少一天后方可轉(zhuǎn)至液氨罐中。
NOTE:若不是我司凍存液請(qǐng)按照凍存液說明書操作，若是自配凍存液需梯度降溫凍存(2-8℃，放置 40min:-20℃,放置 30min-60min，-80℃放置一天后轉(zhuǎn)移至液氮保存)或使用程序降溫盒降溫后，再轉(zhuǎn)移至液氮中保存。
【細(xì)胞復(fù)蘇】
1.液氮取出的細(xì)胞放入干冰中轉(zhuǎn)移到細(xì)胞房，提前準(zhǔn)備好完全培養(yǎng)基，離心管。
2.凍管細(xì)胞在37°C水浴中迅速解凍（大約1-2分鐘）。為了減少污染的可能性，保持凍管瓶蓋在水浴液面之上。 一旦大部分內(nèi)容物解凍，立即將凍管移出水浴，70%的乙醇消毒凍管外壁。
3.將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到含3-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中，輕輕混勻，離心（125 g，3～5分鐘）1000-1200rmp去除培養(yǎng)基， 細(xì)胞沉淀用手指彈松，添加3ml完全培養(yǎng)基混勻細(xì)胞并進(jìn)行計(jì)數(shù)，用適量完全培養(yǎng)基將細(xì)胞密度調(diào)整至0.6-2.0X105，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中，于培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。建議T25培養(yǎng)瓶添加5-7ml完全培養(yǎng)基。當(dāng)密度達(dá)到80%以上時(shí)傳代。
【常見問題】
1、何時(shí)須更換培養(yǎng)基
視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定，常規(guī)細(xì)胞2-3天更換培養(yǎng)基。
2、何時(shí)進(jìn)行傳代
細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)
首次傳代建議1：2傳代，就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。
3、可否使用與原先不同培養(yǎng)基
不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng)，易造成細(xì)胞狀態(tài)不好，最終造成細(xì)胞無(wú)法存活。
4、可否使用與原先不同血清種類
不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。
【發(fā)表過的文獻(xiàn)】
截至到2024年，引用中喬新舟該細(xì)胞發(fā)表過的文獻(xiàn)總數(shù)9篇，總的影響因子54.2，最高影響因子12.70，數(shù)據(jù)如下：
下面列舉了幾篇代表性的文獻(xiàn)，可以參考：
1.論文題目：TRIM21 promotes ubiquitination of SARS-CoV-2 nucleocapsid protein to regulate innate immunity.
期刊： JOURNAL OF MEDICAL VIROLOGY 影響因子：12.7
2.論文題目：PCSK6 attenuates cardiac dysfunction in doxorubicin-induced cardiotoxicity by regulating autophagy.
期刊： FREE RADICAL BIOLOGY AND MEDICINE 影響因子：7.4
3.論文題目：Altered Expression of Transfer-RNA-Derived Small RNAs in Human With Rheumatic Heart Disease.
期刊： Frontiers in Cardiovascular Medicine 影響因子：6.05
4.論文題目：GSK-J4, a Specific Histone Lysine Demethylase 6A Inhibitor, Ameliorates Lipotoxicity to Cardiomyocytes via Preserving H3K27 Methylation and Reducing Ferroptosis.
期刊： Frontiers in Cardiovascular Medicine 影響因子：5.846
5.論文題目：Knockdown of KLF6 ameliorates myocardial infarction by regulating autophagy via transcriptional regulation of PTTG1.
期刊： AMERICAN JOURNAL OF PHYSIOLOGY-CELL PHYSIOLOGY 影響因子：5.0
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細(xì)胞培養(yǎng)
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