木瓜蛋白酶使用秘籍

一、基礎(chǔ)知識(shí)
1.功能：木瓜蛋白酶可消化大部分蛋白底物，比胰蛋白酶范圍更廣。木瓜蛋白酶具有廣泛的特異性，可斷裂基礎(chǔ)氨基酸，亮氨酸或甘氨酸的肽鍵。它還能水解脂類和酰胺類化合物。最佳pH范圍為6.0-7.0。木瓜蛋白酶制劑應(yīng)在使用前在活化溶液中孵育，以確保充分發(fā)揮活性。
2.抑制劑：PMSF、α2-巨球蛋白、Hg2+及其他重金屬等
3.激活劑：EDTA、半胱氨酸、硫化物和亞硫酸鹽

二、木瓜蛋白酶-Absin
1.外觀：淺黃色或白色固體粉末
2.保存：2-8℃干燥保存，有效期1年
3.溶解：取適量本品溶于水配制成10mg/ml的儲(chǔ)存液。使用前需經(jīng)活化以得到完全酶活性，通常用含~5mM L-半胱氨酸的緩沖液來(lái)稀釋，比如，常用酶活化緩沖液含1.1mM EDTA，0.067mM巰基乙醇和5.5mM半胱氨酸鹽酸鹽，經(jīng)30min孵育后，酶得以完全活化。建議使用前經(jīng)0.22um濾膜過(guò)濾除菌。

三、木瓜蛋白酶- Worthington
1.保存：2-8℃干燥保存，有效期6個(gè)月，注意：不要冷凍保存溶解或稀釋后的溶液
2.溶解：可使用EBSS溶解，酶使用前應(yīng)在含有1.1mM EDTA、0.067mM巰基乙醇和5.5mM 半胱氨酸-HCl的溶液中孵育30分鐘。建議在溶解后和使用前經(jīng)0.22um濾膜過(guò)濾除菌。
除此之外，Worthington還有一套木瓜蛋白酶解離系統(tǒng)（Papain Dissociation System）：
Worthington木瓜蛋白酶解離系統(tǒng)是一組用于Huettner和Baughman的神經(jīng)細(xì)胞分離方法的試劑（J. Neurosci.，6，3044，1986）。每批均經(jīng)過(guò)大鼠脊髓神經(jīng)細(xì)胞分離性能測(cè)試，該試劑盒為每次解離提供新鮮制備的酶溶液。
1.組分：包裝內(nèi)含有足夠的材料，可分離5個(gè)獨(dú)立的組織等分試樣，每個(gè)試樣的體積可達(dá) 0.3-0.4cm3。對(duì)于較大的組織樣本，應(yīng)在每個(gè)步驟中按比例準(zhǔn)備較大體積的試劑，并按照方案中所述的相同比例混合。
小瓶1：無(wú)菌Earle平衡鹽溶液 (EBSS)，含鈣、鎂、碳酸氫鹽和酚紅，每包一瓶，100ml，用于配制剩下組分和稀釋酶制劑。
小瓶2：含有L-半胱氨酸和 EDTA 的木瓜蛋白酶，每包含有5x100units一次性小瓶。使用時(shí)用5ml EBSS配制得到20units/ml的木瓜蛋白酶溶液，注意，木瓜蛋白酶溶液需要在 37°C下短暫孵育以確保完全溶解度和活性。
小瓶3：脫氧核糖核酸酶I (DNase)，每包5x2000units一次性試劑瓶。使用時(shí)用0.5ml EBSS配制得到2000units/ml的脫氧核糖核酸酶溶液。避免劇烈混合。
小瓶4：含牛血清白蛋白的卵粘蛋白酶抑制劑，每包一瓶。使用時(shí)用32ml EBSS配制得到10mg/ml的溶液，分裝保存。 
2.保存：2-8°C下儲(chǔ)存4-6個(gè)月。