馬血清對(duì)細(xì)胞的滋養(yǎng)及誘導(dǎo)分化作用介紹

眾所周知，胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)界的“香餑餑”，備受胞胞們的“寵愛”，其實(shí)還有一個(gè)“香煎餅”，大家可知道？對(duì)一些“挑食”的細(xì)胞，馬血清可謂是散發(fā)著一股“煎餅的清香”。
 

馬血清的第一大功能是“滋養(yǎng)”一些特別的細(xì)胞，如免疫細(xì)胞類，成纖維細(xì)胞類，上皮細(xì)胞類，神經(jīng)細(xì)胞類等。需要添加馬血清的常見細(xì)胞類型如下：
 

1.NK（人外周血自然殺傷細(xì)胞）和NK-92 (人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞)

營(yíng)養(yǎng)體系：74%α-MEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基＋0.2mM Inositol＋0.1mM β-mercaptoethanol＋0.02mM Folic Acid＋100-200U/mL recombinant IL-2+12.5%馬血清優(yōu)級(jí)+12.5%胎牛血清優(yōu)級(jí)+ 1%雙抗

2.EL-4 (小鼠胸腺淋巴瘤細(xì)胞)

營(yíng)養(yǎng)體系：89%DMEM高糖基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10%馬血清優(yōu)級(jí)+ 1%雙抗

3.L929 (小鼠成纖維細(xì)胞)和CRFK (貓腎細(xì)胞)

營(yíng)養(yǎng)體系：89%MEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10%馬血清優(yōu)級(jí)+ 1%雙抗

4.MCF 10A (人正常乳腺上皮細(xì)胞)

營(yíng)養(yǎng)體系：94% DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%馬血清+ 1%雙抗+ 20ng/ml EGF+0.5ug/ml氫化可的松Hydrocortisone+ 100ng/ml霍亂霉素choleratoxin+10ug/ml胰島素insulin

5.PC-12(Undifferentiated) (大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(未分化))

營(yíng)養(yǎng)體系：79%RPMI1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基+15%馬血清+ 5%胎牛血清優(yōu)級(jí)+ 1%雙抗

馬血清第二大功能是誘導(dǎo)分化作用，有文獻(xiàn)報(bào)道【1】馬血清在 5-氮雜胞苷誘導(dǎo)脂肪干細(xì)胞成肌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中發(fā)揮重要作用。
 

該研究如下：將第1代長(zhǎng)滿100 mm培養(yǎng)皿的脂肪干細(xì)胞傳代至3個(gè)6孔板，實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)基中加入體積分?jǐn)?shù)為5%馬血清+10 μmol/L 5-氮雜胞苷；對(duì)照組培養(yǎng)基中單純添加 10 μmol/L 的 5-氮雜胞苷；空白組為單純低糖 DMEM 培養(yǎng)基，其余培養(yǎng)、傳代及鑒定所需的條件相同。每日光鏡觀察記錄形態(tài)，在培養(yǎng)的第 7，14，28，35 天行免疫熒光和流式細(xì)胞儀檢測(cè)肌蛋白表達(dá)差異。
 

該文獻(xiàn)的結(jié)果與結(jié)論是免疫熒光檢測(cè)成肌特異性胞質(zhì)蛋白表達(dá)以及流式細(xì)胞檢測(cè)相應(yīng)蛋白表達(dá)率提示，加入馬血清后的實(shí)驗(yàn)組脂肪干細(xì)胞的成肌速度和誘導(dǎo)成肌所需時(shí)間明顯比單純加入 5-氮雜胞苷的對(duì)照組更有優(yōu)勢(shì)。實(shí)驗(yàn)初步表明馬血清在促進(jìn)脂肪干細(xì)胞誘導(dǎo)成肌方面起著縮短誘導(dǎo)成肌所需時(shí)間的作用。
 

同時(shí)，馬血清在誘導(dǎo)C2C12 (小鼠成肌細(xì)胞)分化為多核肌管方面也發(fā)揮重大作用。C2C12細(xì)胞是由D·Yaffe和O·Saxel建立的小鼠成肌細(xì)胞株的亞克��；該細(xì)胞分化很快，形成可伸縮的肌管并生成特征性的肌蛋白。將狀態(tài)良好的骨骼肌細(xì)胞以0.9×105接種在96孔板上（每孔100ul），置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，待細(xì)胞融合到70-80%后，更換成的含有2%馬血清的完全培養(yǎng)基中，進(jìn)行誘導(dǎo)分化。（如圖2所示）
 

圖2 C2C12 (小鼠成肌細(xì)胞)向多核肌管方向分化

另外，也有文獻(xiàn)報(bào)道【2】傳代培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(P3)在20%馬血清的L-DMEM培養(yǎng)液中可分化為脂肪細(xì)胞。
 

此外， 10%馬血清可代替FBS用于支持綿羊紅細(xì)胞的體外抗體應(yīng)答； 血清 IgG 制備，白蛋白的提取及生物活性研究；免疫組化（IHC）、酶聯(lián)免疫(ELISA )等免疫實(shí)驗(yàn)的封閉劑。
 

【1】劉杰,傅強(qiáng).馬血清在脂肪干細(xì)胞成肌誘導(dǎo)中的作用[J].中國(guó)組織工程研究, 15(14)

【2】趙文靜,陳亞潔,劉薇.人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志.2006.16(18):2744-2747

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