人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC培養(yǎng)過程中出現(xiàn)的問題及解決方法

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVEC）是臍靜脈的重要構(gòu)成細(xì)胞之一。當(dāng)進(jìn)行血管內(nèi)皮細(xì)胞實(shí)驗(yàn)時(shí)，通常使用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，而非靜脈內(nèi)皮細(xì)胞或動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞。永生化的HUVEC會(huì)通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶RFP基因或GFP基因。

 HUVEC細(xì)胞基本信息

圖1 HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞）

首先要討論的是HUVEC的“嘴巴刁不刁”？通常來說，HUVEC的“胃口”還是蠻“刁”的，營養(yǎng)需求很高，除了營養(yǎng)種類豐富的F12和必不可少的胎牛血清（如表2所示），肝素和血管內(nèi)皮生長因子也是必須的。如圖2所示，長勢良好的HUVEC呈鵝卵石樣，輪廓清晰，鋪展均勻，一般2-3天可傳代。

下表為HUVEC精心準(zhǔn)備的“食譜”

圖2 長勢良好的HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞）

其次要討論一下為啥頭天換液，第二天HUVEC無限細(xì)胞系突然出現(xiàn)空泡化？如圖3所示，嚴(yán)重空空泡化的HUVEC。這里要注意的是有限細(xì)胞系的空泡化往往是細(xì)胞凋亡的顯著特征，與細(xì)胞本身狀態(tài)有關(guān)。而無限細(xì)胞系空泡化通常與外界因素有管，有以下兩種可能： 第一點(diǎn)是培養(yǎng)液的pH值與細(xì)胞正常所需pH值差別太大，導(dǎo)致細(xì)胞代謝異常，出現(xiàn)空泡化；第二點(diǎn)是在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，由于血清濃度不夠、藥物作用、外界刺激等情況下導(dǎo)致細(xì)胞代謝出現(xiàn)問題，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀況下會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞空泡化的情況。

圖3 空泡化的HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞） 

解決細(xì)胞空泡化，通常有兩種方法：1. 測定完培的pH，看其酸堿性是否適宜。多數(shù)細(xì)胞適宜的pH范圍為7.2-7.4。2. 若培基或血清是開封存放很久的，可換用新鮮的完配給細(xì)胞換液；若都是新開封的，可換用新批次的基培或血配制培養(yǎng)液，給細(xì)胞換液觀察。

最后要討論的是如何解決HUVEC聚團(tuán)問題？培養(yǎng)瓶尤其是培養(yǎng)板的親水性較差時(shí)或血清中的促貼壁因子不足時(shí)，會(huì)導(dǎo)致HUVEC細(xì)胞聚團(tuán)問題。解決辦法：培養(yǎng)瓶前一天用明膠（abs47051214)包被可有效預(yù)防HUVEC聚團(tuán)。包被方法：以 T25 培養(yǎng)瓶為例，取5ml的明膠，加入培養(yǎng)瓶， 放置37℃條件下至少30分鐘，然后用槍頭將液體吸出即可。如圖示4所示，是鋪展均勻的HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞）。

圖4所示，正常貼壁，伸展均勻的HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞）