利用熒光法檢測(cè)蛋白濃度的兩種方式

蛋白質(zhì)定量是許多蛋白質(zhì)生物學(xué)工作流程的重要組成部分，是蛋白質(zhì)電泳、蛋白質(zhì)印跡、質(zhì)譜和免疫分析等常用技術(shù)之前的必要步驟。與傳統(tǒng)的BCA、Bradford等比色法測(cè)蛋白的方式相比，熒光法測(cè)蛋白動(dòng)態(tài)范圍更寬、準(zhǔn)確性更高。

蛋白質(zhì)定量是許多蛋白質(zhì)生物學(xué)工作流程的重要組成部分，是蛋白質(zhì)電泳、蛋白質(zhì)印跡、質(zhì)譜和免疫分析等常用技術(shù)之前的必要步驟。與傳統(tǒng)的BCA、Bradford等比色法測(cè)蛋白的方式相比，熒光法測(cè)蛋白動(dòng)態(tài)范圍更寬、準(zhǔn)確性更高。

試劑及儀器
• Qubit™ Protein Assay Kits（Thermo：Q33212）
• Qubit 4熒光計(jì)（Thermo）
• Fluo-200熒光計(jì)（奧盛）
• Feyond-A300多功能酶標(biāo)儀（奧盛）

方法
• 標(biāo)品配置

2.在96孔黑色平底微孔板的每孔中加入10uL標(biāo)品溶液后，每孔中再添加190uL的Mix工作液，混勻后避光5分鐘，開(kāi)始儀器檢測(cè)，標(biāo)品與空白布局如圖1，儀器參數(shù)如表1。

理論濃度	Qubit4	Fluo-200	Feyond-A300
12.5	20	19.11	8.023
25	33.2	30.59	29.319
50	50.6	46.16	50.626
100	95.2	92.94	101.835
200	184	192.39	197.206
300	286	299.71	302.978
400	400	401.22	398.596

總結(jié)
Qubit 熒光檢測(cè)蛋白試劑盒，不僅在Qubit儀器上可以適用，也可在Feyond-A300的熒光檢測(cè)功能上適用，并且準(zhǔn)確性基本無(wú)差異，熒光計(jì)檢測(cè)無(wú)需建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，僅需進(jìn)行標(biāo)品點(diǎn)的校準(zhǔn)，便可直接進(jìn)行濃度的測(cè)試，簡(jiǎn)單便捷。Feyond-A300的標(biāo)曲保存功能，亦可滿足該需求，僅需一次建立標(biāo)曲后，將標(biāo)曲保存于標(biāo)曲庫(kù)，后續(xù)僅需調(diào)取該標(biāo)曲便可直接給出未知樣品的濃度。