酶標板性能判斷的三個方法

酶標板(ELISA PLATE):在酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)中, 參與免疫學反應的抗原、抗體、標記抗體或抗原的純度、濃度和比例；緩沖液種類、濃度和離子強度、pH值和反應溫度、時間等條件起著關鍵作用。此外,作為載體的固相聚苯乙烯(Polystyrene)表面對抗原、抗體或抗原抗體復合物的吸附也起著重要作用。 抗原、抗體和其它生物分子通過多種機制吸附至載體表面，這包括通過疏水鍵、流水/離子鍵的被動吸附,通過引入其它活性基團如氨基和碳基的共價結(jié)合，以及通過表面改性后的親水鍵結(jié)合。
                        
酶標板性能判斷：
良好的酶標板應該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間、同一板各孔之間性能相近。酶標板由于原料的不同和制作工藝的差別，各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大，因此，每一批號的酶標板在使用前須事先檢查其性能。
1、常用的檢查方法為：以一定濃度的人igg（一般為10ng/ml）包被elisa板各孔，洗滌后每孔內(nèi)加入適當稀釋度的酶標抗人igg抗體，保溫后洗滌，加底物顯色，終止酶反應后，分別測每孔溶液的吸光度�？刂品磻獥l件，使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右。計算全部讀數(shù)的平均值。所有單個讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差，應小于10%。以下以a、b、c三款酶標板為例。
2、直接法：檢測human igg在酶標板表面的吸附
3、雙抗體夾心法：包被山羊抗人抗體檢測陽性血清中抗原
由上圖可以看出，這三類酶標板中，a類酶標板具有更好的蛋白吸附效果，同時也提高蛋白吸附的靈敏度，能夠提供更為可靠的實驗數(shù)據(jù)。另外，可以詢問酶標板的批內(nèi)差異，以下是某款酶標板的批內(nèi)差異。由批內(nèi)差異數(shù)據(jù)圖可以看出，該酶標板具有很好地批間穩(wěn)定性，批內(nèi)變異系數(shù)（cv）差異均在5.0％附近，明顯低于業(yè)內(nèi)關于臨床免疫反應用酶標板的質(zhì)量控制標準中批內(nèi)變異系數(shù)低于10.0%的要求，因此也適合用于elisa實驗。