人原代肝細胞的Nucleofector電轉(zhuǎn)實例分享

Lonza Bioscience

Lonza Bioscience為全球?qū)W術(shù)和產(chǎn)業(yè)研究機構(gòu)的創(chuàng)新性研究提供研究和發(fā)現(xiàn)工具，并為制藥和生物制藥生產(chǎn)提供解決

正常的原代細胞比腫瘤細胞更能代表體內(nèi)細胞的功能。利用原代細胞研究相關(guān)通路的分子機制是更加可靠的。盡管大多數(shù)增殖的、腫瘤來源的細胞系可以通過標準的轉(zhuǎn)染方法(如脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染或聚乙烯亞胺[PEI])輕松轉(zhuǎn)染，但轉(zhuǎn)染原代細胞仍然是一個巨大的挑戰(zhàn)。原代人肝細胞(PHH)是臨床前藥物開發(fā)中確定藥物代謝、轉(zhuǎn)運和毒性的“金標準”體外模型。

然而，正如非分裂原代細胞都難以轉(zhuǎn)染一樣，使用者面臨在保持肝細胞分化和特化功能的同時又要達到高效轉(zhuǎn)染的挑戰(zhàn)。原代肝細胞對操作和環(huán)境變化非常敏感，因此成功轉(zhuǎn)染這些細胞是非常困難的。

 
為了滿足使用Nucleofector電轉(zhuǎn)技術(shù)轉(zhuǎn)染人原代肝細胞的需要，在這篇描述了保持細胞功能下的兩個電轉(zhuǎn)程序：DS-150和EX-147。

用熒光顯微鏡分別檢測pmax GFP^TM質(zhì)粒DNA和Cleancap mCherry RNA的轉(zhuǎn)染效率；并分析細胞活力、膽汁管形成、白蛋白分泌和CYP3A4、CYP1A2和CYP2B6代謝產(chǎn)物的生成。

使用DS-150程序?qū)�DNA的電轉(zhuǎn)效率高達20%，對mRNA的電轉(zhuǎn)效率高達85%，并持續(xù)培養(yǎng)7天。在最初的轉(zhuǎn)染后，觀察到存活率、白蛋白分泌和CYP3A4活性的輕微下降，在7天的療程后恢復。轉(zhuǎn)染的PHH形成了復雜的、分支狀的膽管網(wǎng)絡(luò)，并在整個培養(yǎng)過程中保持了良好的形態(tài)。

為了達到更高的效率，使用EX-147程序，在轉(zhuǎn)染后24小時DNA轉(zhuǎn)染效率高達68%。然而，隨著時間的推移與未轉(zhuǎn)染對照相比，細胞活力和特征性肝功能降低，限制了該項目用于短期研究。

綜上所述，對于原代肝細胞，我們開發(fā)了“高效DNA程序”和“高功能mRNA程序”,有效的DNA和mRNA表達并保留功能長達7天，從而改善了主要人類肝細胞在藥物代謝機制研究中的使用。

Lonza不僅能提供高質(zhì)量的起始材料，以確保肝細胞的高活性和功能性，也提供溫和高效的轉(zhuǎn)染處理過程。


 

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