人Elisa試劑盒使用注意事項(xiàng)與操作步驟

人Elisa試劑盒操作步驟 ：

1．用蓋片鑷人Elisa試劑盒將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布。

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）。 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)。 

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中。

5．將人Elisa試劑盒培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

人Elisa試劑盒注意事項(xiàng):

       1. 人Elisa試劑盒解凍與存放：-20℃取出后建議放入2～8℃冰箱中解凍約，每隔一段時(shí)間輕輕搖晃均勻，不可直接放入溫度較高處解凍，避免因溫度改變太大，造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀，血清的質(zhì)量下降。若短期無法用完一瓶，建議無菌分裝,再放回冷凍，避免反復(fù)凍融。4℃長(zhǎng)時(shí)間保存后血清中的變性脂蛋白及纖維蛋白，形成絮狀物質(zhì)變差。

      2. 人Elisa試劑盒是否滅活：加熱可滅活血清中補(bǔ)體系統(tǒng)，在極少數(shù)情況下（培養(yǎng)ES細(xì)胞，平滑肌細(xì)胞時(shí)）建議滅活，在培養(yǎng)其余細(xì)胞時(shí)不建議滅活血清。血清滅活非常容易產(chǎn)生沉淀，如必須滅活請(qǐng)按56℃，30 min，輕微搖晃原則操作，滅活溫度高、時(shí)間長(zhǎng)、搖晃不均都容易產(chǎn)生沉淀。

      3.人Elisa試劑盒培養(yǎng)基：無血清培養(yǎng)基在結(jié)果重復(fù)性、細(xì)胞體外分化方面有優(yōu)勢(shì)，但是，血清仍然是培養(yǎng)液中最基本的添加物，尤其是在原代培養(yǎng)或細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不良時(shí)，常常會(huì)先使用有血清的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，待細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛后再換成無血清培養(yǎng)液。

人Elisa試劑盒樣本處理：

1．剛?cè)〉玫男迈r組織樣本用PBS洗凈。

2．準(zhǔn)確稱取50mg組織，加入1ml勻漿緩沖液A，用玻璃勻漿器充分勻漿。

3．在1000g，4℃離心10分鐘，棄沉淀，取上清。