ELISA試劑盒原理與步驟的各種要點(diǎn)

操作步驟：

1、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為480U/ml,320U/ml,160U/ml,80U/ml,40U/ml）。

2、加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4、配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6、加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7、溫育：操作同3。

8、洗滌：操作同5。

9、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11、測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

實(shí)驗(yàn)原理：

用于免疫酶技術(shù)的酶有很多，如過氧化物酶，堿性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳糖苷酶，葡萄糖氧酶，碳酸酐酶，乙酰膽堿酯酶，6－磷酸葡萄糖脫氧酶等。常用于ELISA法的酶有辣根過氧化物酶，堿性磷酸酯酶等，其中尤以辣根過氧化物酶為多。由于酶摧化的是氧化還原反應(yīng)，在呈色后須立刻測定，否則空氣中的氧化作用使顏色加深，無法準(zhǔn)確地定量。

產(chǎn)品概述：

    彈力纖維(Elastic Fiber)主要分布于人體的動脈壁、肺泡壁、皮膚，新鮮時(shí)呈黃色，折光性強(qiáng)。常用的彈力纖維染色法有Gomori醛品紅法、間苯二酚堿性品紅法、地衣紅法、維多利亞藍(lán)法、鐵dian蘇木素法等。間苯二酚堿性品紅染色液主要用于彈力纖維染色，又稱Weigert樹脂酚復(fù)紅染色液。Van Gieson膠原纖維染色法的染色原理與陰離子染料分子的大小和組織的滲透有關(guān)。PA分子量小，麗春紅和復(fù)紅次之，淡綠分子量大。VG染色后，肌纖維呈黃色，膠原纖維呈紅色。彈力纖維染色可以顯示皮膚組織中彈力纖維的變化，如彈力纖維痣、皮膚環(huán)狀肉芽腫、硬度病等；顯示與判定心內(nèi)膜及動脈的病變，觀察某些病變中是擊伴有彈力纖維的增生或破壞；還可鑒別腫瘤組織成分如彈力纖維瘤，經(jīng)彈力纖維染色后，可清晰見到瘤體內(nèi)彈力纖維球。

    改良Weigert彈力纖維染色液染色原理在于間苯二酚品紅與鐵離子形成Lake復(fù)合物，其游離的氨基與彈力纖維內(nèi)的氫鍵牢固結(jié)合呈黑色。較常規(guī)Weigert間苯二酚品紅彈力纖維染色多了氧化和漂白過程，適用于顯示各種彈力纖維，比傳統(tǒng)的Weigert間苯二酚品紅法更清晰、不易脫色、保存時(shí)間長。