熒光素酶報(bào)告基因用品的選擇與應(yīng)用

       一 、什么是熒光素酶報(bào)告基因？

 

       報(bào)告基因（Reporter Gene）：通常指可編碼某種蛋白或酶，其表達(dá)產(chǎn)物容易被檢測(cè)，并且能與內(nèi)源性背景蛋白相區(qū)別的基因，通過(guò)它的表達(dá)產(chǎn)物來(lái)標(biāo)定目的基因的表達(dá)調(diào)控。

 

 

       而理想的報(bào)告基因必須具備以下幾個(gè)條件：

 

       1.編碼的表達(dá)產(chǎn)物必須與細(xì)胞內(nèi)源性的所有基因相區(qū)別，編碼產(chǎn)物的活性不受宿主細(xì)胞的干預(yù)。

       2.有快速簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、靈敏的檢測(cè)方法，且重現(xiàn)性好、結(jié)果可靠，測(cè)量數(shù)據(jù)應(yīng)該有較寬的線性范圍。

       3.細(xì)胞內(nèi)的其他基因產(chǎn)物不會(huì)干擾報(bào)告基因產(chǎn)物的檢測(cè)，同時(shí)報(bào)告基因的表達(dá)也不改變宿主細(xì)胞的生理功能。

 

       常用的報(bào)告基因有：

 

       氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶 （CAT），氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶 （CAT），人生長(zhǎng)激素（hGH），分泌型堿性磷酸酶（SEAP），熒光素酶（Luciferase），熒光蛋白。今天我們就來(lái)說(shuō)說(shuō)熒光素酶報(bào)告基因。

 

       熒光素酶（Luciferase）是自然界中能發(fā)出熒光的酶的統(tǒng)稱。他們可以通過(guò)酶促反應(yīng)催化底物產(chǎn)生自發(fā)熒光。熒光素酶因其便于檢測(cè)和靈敏度高等特性常做為報(bào)告基因被廣泛用于生化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中。
 

       其中應(yīng)用最廣泛的是螢火蟲(chóng)熒光素酶（Firefly luciferase ）和海腎熒光素酶（Renilla luciferase），兩者可分別催化各自的底物發(fā)出不同顏色的熒光，且兩種光吸收波長(zhǎng)不同，檢測(cè)互不干擾，因此可在同一個(gè)化學(xué)反應(yīng)體系中同時(shí)使用，由此雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)受到廣泛青睞。

 

       了解了什么是報(bào)告基因和熒光素酶后，我們來(lái)看看什么是熒光素酶報(bào)告基因。

 

       熒光素酶報(bào)告基因是指以熒光素(luciferin)為底物來(lái)檢測(cè)螢火蟲(chóng)熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報(bào)告系統(tǒng)。這種報(bào)告系統(tǒng)，是檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子與目的基因啟動(dòng)子區(qū)DNA相互作用的一種檢測(cè)方法。分單熒光素酶報(bào)告基因和雙熒光素酶報(bào)告基因。

 

       雙熒光素酶報(bào)告基團(tuán)主要應(yīng)用方向有：

 

       1.驗(yàn)證microRNA同mRNA靶向互作；

       2.驗(yàn)證microRNA同lncRNA靶向互作；

       3.啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)分析

       4.啟動(dòng)子SNP分析

       5.驗(yàn)證特定轉(zhuǎn)錄因子同其調(diào)控序列的作用

       6.分析信號(hào)通路是否激活等。

 

       二 如何選擇熒光素酶產(chǎn)品？

 

       我們知道有單熒光素酶報(bào)告基因和雙熒光素酶報(bào)告基因，我們就需要根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要構(gòu)建載體，首先我們需要了解自己到底要做什么？清楚的知道我們的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案和目的。一般來(lái)說(shuō)，雙熒光素酶體系應(yīng)用于：

 

       （1）監(jiān)測(cè)細(xì)胞數(shù)量（實(shí)驗(yàn)前&實(shí)驗(yàn)后，例如細(xì)胞毒性的影響）

 

       （2）評(píng)估轉(zhuǎn)染效率，消除組間轉(zhuǎn)染效率的影響

 

       （3）分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果的特異性

 

       （4）穩(wěn)定細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)中需檢測(cè)不同因子對(duì)穩(wěn)定細(xì)胞系的影響，用對(duì)照（雙熒光素酶體系）去檢測(cè)可能的細(xì)胞毒性以及對(duì)特異性的影響

 

       單熒光素酶系統(tǒng)則適用于：

 

       （1）同一實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行多次檢測(cè)分析（活細(xì)胞中監(jiān)測(cè)時(shí)間曲線動(dòng)態(tài)分析）

 

       （2）穩(wěn)定細(xì)胞系，轉(zhuǎn)染/轉(zhuǎn)導(dǎo)效率在穩(wěn)定細(xì)胞系中并不非常重要

 

       艾美捷科技作為專業(yè)的生命科學(xué)領(lǐng)域解決方案供應(yīng)商，為您推薦Genecopoeia品牌的熒光素酶相關(guān)產(chǎn)品，極大滿足您各方面的需求。

 

       如果您的實(shí)驗(yàn)需要構(gòu)建雙熒光素酶報(bào)告載體，我們有下列產(chǎn)品供您挑選：

 

       1.我們有雙熒光素酶報(bào)告載體產(chǎn)品
 

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格	產(chǎn)品描述
pEZX-FR01	ZX001	10ug	包含螢火蟲(chóng)熒光素酶(Fluc)和海腎熒光素酶(Rluc)的報(bào)告載體
pEZX-FR02	ZX002	10ug
pEZX-FR03	ZX003	10ug

       2.還有分泌型堿性磷酸酶SEAP報(bào)告基因載體的產(chǎn)品
 

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格	產(chǎn)品描述
pEZX-GN01	ZX101	10ug	包含Gluc和SEAP的報(bào)告載體
pEZX-GN03	ZX102	10ug
pEZX-GA01	ZX103	10ug
pEZX-GA02	ZX104	10ug
pEZX-GA03	ZX105	10ug
pEZX-LvGN01	ZX106	10ug	包含Gluc和SEAP的報(bào)告載體 (lentiviral)
pEZX-LvGA01	ZX107	10ug

 

       如果您需要檢測(cè)熒光素酶相關(guān)的產(chǎn)品，我們也有：

 

       （1）雙熒光素酶活性檢測(cè)產(chǎn)品
 

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品貨號(hào)	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品描述
Luc-Pair™ Duo-Luciferase Assay Kit 2.0	LF001	100 rxns	可方便、高效檢測(cè)螢火蟲(chóng)和海腎熒光素酶活性。
	LF002	300 rxns
	LF003	1000 rxns
Luc-Pair™ Duo-Luciferase HS Assay Kit	LF004	100 rxns	可方便、高效檢測(cè)螢火蟲(chóng)和海腎熒光素酶活性。
	LF005	300 rxns
	LF006	1000 rxns

 

       （2） 單熒光素酶檢測(cè)
 

       （3）穩(wěn)定型雙熒光素酶活性檢測(cè)產(chǎn)品，適用于高通量熒光素酶活性檢測(cè)
 

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品貨號(hào)	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品描述
Luc-Pair™ Duo-Luciferase HT Assay Kit	LF013	10 mL	穩(wěn)定型熒光素酶檢測(cè)試劑盒，適用于高通量的螢火蟲(chóng)（FLuc）和海腎（Rluc）熒光素酶的活性檢測(cè)。
	LF014	30 mL
	LF015	100 mL
Luc-Pair™ Firefly Luciferase HT Assay Kit	LF016	10 mL	穩(wěn)定型熒光素酶檢測(cè)試劑盒，適用于高通量的螢火蟲(chóng)（FLuc）熒光素酶的活性檢測(cè)。
	LF017	30 mL
	LF018	100 mL
Luc-Pair™ Renilla Luciferase HT Assay Kit	LF019	10 mL	穩(wěn)定型熒光素酶檢測(cè)試劑盒，適用于高通量的海腎（RLuc）熒光素酶的活性檢測(cè)。
	LF020	30 mL
	LF021	100 mL

 

       （4）分泌型熒光素酶和堿性磷酸酶活性檢測(cè)產(chǎn)品

 

     
        不知道這些產(chǎn)品有沒(méi)有符合您的需求的呢？
 

     
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